На стол пролита концентрированная кислота ваша тактика
Принцип: интенсивность помутнения при коагуляции белка сульфосалициловой кислотой пропорциональна его концентрации.
Реактивы:
1. 3%-ный раствор сульфосалициловой кислоты.
2. 0,9%-ный раствор хлорида натрия.
3. Стандартный раствор альбумина — 1%-ный раствор (1 мл раствора, содержащий 10 мг альбумина): 1 г лиофилизированного альбумина (из человеческой или бычьей сыворотки) растворяют в небольшом количестве 0,9%-ного раствора хлорида натрия в колбе вместимостью 100 мл, а затем доводят до метки тем же раствором.
Реактив стабилизируют прибавлением 1 мл 5%-ного раствора азида натрия (NaN3). При хранении в холодильнике реактив годен в течение 2 месяцев.
Специальное оборудование: фотоэлектроколориметр.
Ход определения:
В градуированную центрифужную пробирку вносят 1,25 мл профильтрованной мочи, доливают до 5 мл 3%-ным раствором сульфосалициловой кислоты, перемешивают.
Через 5 мин измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волны 590—650 нм (оранжевый или красный светофильтр) против контроля в кювете длиной оптического пути 5 мм.
Контролем служит пробирка, в которой к 1,25 мл профильтрованной мочи долили до 5 мл 0,9%-ный раствор хлорида натрия.
Расчет ведут по калибровочному графику, для построения которого из стандартного раствора готовят разведения, как указано в таблице.
| N пробирки | Стандартный раствор (мл) | 0,9% раствор хлорида натрия (мл) | Концентрация белка (г/л) |
| 0,05 | 9,95 | 0,05 | |
| 9,9 | 0,1 | ||
| 0,2 | 9,8 | 0,2 | |
| 0,5 | 9,5 | 0,5 | |
| 1,0 | 9,0 | 1,0 |
Прямолинейная зависимость при построении калибровочного графика сохраняется до 1 г/л. При более высоких концентрациях пробу следует разводить и учитывать разведение при расчете.
Ложноположительные результаты могут быть получены при наличии в моче контрастных веществ, содержащих органический йод. Поэтому тест нельзя использовать у лиц, принимающих препараты йода; ложноположительный результат может быть также обусловлен приемом сульфаниламидных препаратов, больших доз пенициллина и при высоких концентрациях в моче мочевой кислоты.
Обнаружение в моче белка Бенс-Джонса
Белки Бенс-Джонса — термочувствительные микромолекулярные парапротеины, свертывающиеся при относительно низкой температуре (40-60°С), а при кипячении вновь растворяющиеся.
Принцип метода основан на обнаружении в моче белка при t 45-55°C.
Ход определения. К 10 мл мочи добавляют 3-4 капли 10% уксусной кислоты (рН 5-6) и 2 мл насыщенного раствора поваренной соли (NaCL). Осторожно нагревают на водяной бане. При наличии в моче парапротеинов при t 45-55°C появляется диффузное помутнение, которое усиливается при повышении температуры (t 66-72°C) и сопровождается появлением больших хлопьев, осаждающихся на дно пробирки. При повышении температуры до 80-100 °С осадок растворяется.
При обычной протеинурии помутнение (образование хлопьев) наступает при температуре выше 55°С, образование осадка - при кипячении выше температуры 55°С, увеличение осадка - при t кипения 90-100°С.
Самостоятельная работа с исследовательским этапом
Методические установки:
ü прочитать и законспектировать методы определения белка в моче в рабочих тетрадях;
ü затем получить у преподавателя образцы биологического материала;
ü провести самостоятельную исследовательскую работу пользуясь методическим материалом;
ü полученные результаты исследования оформить согласно требованиям заполнения бланков анализа.
| Задание №1. Качественное определение белка в моче пробой с 20% раствором сульфосалициловой кислоты (C7H6O6S) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Посуда, оборудование и реактивы: | · химические и центрифужные пробирки · штативы для пробирок · градуированные пипетки · пастеровские пипетки · резиновые груши · черный фон · 20% раствор сульфосалициловой кислоты | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Ход исследования: | В 2 пробирки одинакового диаметра наливают по 2 мл отфильтрованной мочи кислой реакции. Одна пробирка – опытная, вторая – контрольная. В опытную пробирку добавляют 2 капли 20% раствора сульфосалициловой кислоты. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Опытную пробирку сравнивают с контрольной на черном фоне. Наличие помутнения – положительная реакция. Необходимо подогреть пробирку – если истинный белок, муть усилится, если ложный (соли, слизь) – исчезнет. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Задание №2. Качественное определение белка в моче пробой Геллера | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Посуда, оборудование, реактивы | · химические и центрифужные пробирки · штативы для пробирок · градуированные пипетки на 1 мл · резиновые груши · черный фон · 50% раствор азотной кислоты (НNO3) · реактив Ларионовой · секундомер | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 1.В пробирку наливают 1 мл реактива Ларионовой 2.Затем осторожно по стенке наслаивают 1 мл мочи Соотношение всегда 1:1 Жидкости не должны смешиваться. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Интерпретация полученных результатов: | Пробу оставляют на 3 мин. Через 3 мин. Отсчитывают результат реакции. При положительной реакции на белок на границе мочи и кислоты (или реактива) образуется белое непрозрачное кольцо. Реакцию оценивают на темном фоне, в проходящем свете. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Задание №3. Определение белка в моче с помощью тест-полосок | Для выявления протеинурий используют различные монотест – полоски: Альбуфан, Альбустикс, Биофан и политесты: Трискан, Нонафан и др. Определение производят, ориентируясь на конкретную инструкцию | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Посуда, оборудование, реактивы | · тест-полоски Альбуфан | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Ход определения: | Тест-полоску погружают в исследуемую мочу так, что бы одновременно смочить обе индикаторные зоны. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Интерпретация полученных результатов: | Оценку содержания белка проводят через 60 с после смачивания полоски мочой, пользуясь цветной шкалой. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Задание №4. Запишите полученные данные анализа мочи на белок в рабочих тетрадях | Проба мочи № ___
В нормальной моче белок содержится в минимальных количествах, которые не обнаруживаются обычными качественными реакциями. Верхняя граница нормы – 0,033 г/л. Протеинурия (альбуминурия) – появление белка в моче выше 0,033 г/л, при которых лабораторные пробы на белок становятся положительными. Контрольные вопросы и задания А. Ответьте на поставленные вопросы, используя рабочую тетрадь 1. Как называется появление белка в моче? 2. Какие виды ренальных протеинурий Вы знаете? 3. Значение анализа на белок мочи в медицине для диагностики и контроля над лечением больных? 4. Назовите классификацию протеинурий. 5. Назовите причины внепочечных протеинурий. 6. Что такое белок Бенс-Джонса? 7. Как определяют рН мочи? 8. Требования к моче для определения белка? 9. Как приготовить реактив Ларионовой? 10. На каких свойствах белка основаны методы его определения? 11. Как развести мочу в 8 раз? 12. Как определить истинный белок или нет? 13. Почему моча для определения белка должна быть кислой реакции? 14. Назовите причины физиологических протеинурий. 15. Расскажите методику обнаружения белка в моче с 20% сульфосалициловой кислотой. 16. Клиническое значение определения белка в моче. 17. Принципы использования тест – полосок, их преимущества, классификация, ход исследования, основные правила. 18. На стол пролита концентрированная азотная кислота. Ваша тактика? 19. Раствор азотной кислоты попал Вам на кожу. Ваши действия? 20. Как приготовить 300 мл 20% сульфосалициловой кислоты 21. Рассчитайте количество белка в исследуемой моче, если: Задание 1. Мочу развели в 5 раз Задание 2. Мочу первоначально развели в 10 раз, а затем разведенную в 10 раз мочу развели еще в 3 раза. Б.Запишите в рабочей тетради термины и дайте им обозначение, используя изученный материал
Домашнее задание: 1. Знать теоретический и практический материал. 2. Отвечать на контрольные вопросы. 3. Знать термины. 4. Подготовить лекционный материал: - причины и виды протеинурий. Литература для самостоятельной подготовки: Камышников В.С. Методы клинических лабораторных исследований М: МЕДпресс-информ, 2011. Стр. 37-41 Дополнительная: · Кишкун А.А. Клиническая лабораторная диагностика. – М.: ГЭОТАР – Медиа, 2008. Опорные тесты с ответами1. На стол пролита концентрированная кислота. Ваша тактика:
2. Унифицированными называются единые, утвержденные Министерством здравоохранения методы исследования, обязательные для всех лабораторий: 3. При взвешивании нужно сидеть строго против весов, а не сбоку! Ящик с разновесом помещают справа от весов, а взвешивают предмет – слева: 4. Весы, применяемые для взвешивания в лаборатории:
5. Использование унифицированных методов необходимо для:
6. "Положение об унифицикации клинических лабораторных методов исследования " утверждено приказами Министерства здравоохранения:
7. В целях подготовки ЛПУ к работе в условиях бюджетно-страховой медицины и повышения эффективности их деятельности утверждено Положение об аккредитации клинико-диагностических лабораторий:
8. Номер приказа, отражающего дальнейшее совершенствование контроля качества клинических лабораторных исследований:
9. Правила по технике безопасности, которые должен выполнять лаборант:
10. Функциональные обязанности лаборанта:
11. Виды исследований, относящиеся к общеклиническим:
12. Основой определения должностных окладов работников здравоохранения является:
13. Единая тарифная сетка включает: 14. Размер тарифной ставки первого разряда:
15. Тарифная ставка первого разряда:
16. Регулирование оплаты труда работников бюджетной сферы осуществляется: a. с учетом только возраста и стажа работника тесты по кдл. Лабораторная диагностика Часть 1
Единственный в мире Музей Смайликов -вытереть тряпкой и обмыть поверхность стола водой -обмытое место необходимо промыть раствором соды и через 1-2 минуты вытереть тряпкой +жидкость следует засыпать песком, а затем собрать песок -исследование желудочного и дуоденального содержимого +оказание гарантированных видов медицинской помощи по программе обязательного медицинского страхования -подготовка медицинских кадров и научные исследования -медицинская карта амбулаторного больного -соблюдение правил внешней культуры поведения -соблюдение правил внутренней культуры +соблюдение деонтологических норм -на 25 малых квадратов -на 4 малых квадратов +на 16 малых квадратов -гемоглобин - 140 г/л -эритроциты - 4,7 х 1012/л +нейтрофилез со сдвигом влево -лейкопения со сдвигом вправо -гиперсегментация ядер нейтрофилов -обильная мясная пища -15-и часовое голодание +эритроциты, Hb, цветной показатель, СОЭ, лейкоциты, лейкоформула -Hb, эритроциты, лейкоциты, свертываемость -Нb, СОЭ, лейкоциты, ретикулоциты -лейкоциты ? 8,0 х 109/л +гемоглобин - 60 г/л -нейтрофилы с/я - 50% -3% раствор хлорида натрия +5% раствор цитрата натрия -3% раствор уксусной кислоты -горячие или холодные ванны -нет правильного ответа -в 100 больших квадратах -в 25 больших квадратах +в 5 больших квадратах по диагонали, разграфленных на 16 малых -в 5 больших квадратах, разграфленных на 16 малых -в 80 малых квадратах -понижение сопротивляемости организма -прием лекарственных препаратов +все перечисленное верно +аплазии костного мозга -3 % раствором хлорида натрия -3 % раствором уксусной кислотой -защитная функция ? участвуют в процессе свертывания крови -увеличение объема эритроцитов -увеличение содержания глобулинов крови -уменьшение вязкости крови +3% раствор уксусной кислоты (с метиленовым синим) -0,9% раствор хлорида натрия -3,5% раствор хлорида натрия -обеспечивает транспорт О2 -обеспечивает транспорт СО2 -участвует в поддержании рН крови -цветной показатель ? 0,9 -эритроциты - 4,2 х 1012/л +лейкоциты -? 2,1 х 109/л -гемоглобин - 120 г/л +эритроциты - 8,0 1012/л -лейкоциты - 8,8 х 109/л +гемоглобин 80 г/л -лейкоциты 6,0 х 109/л -цветной показатель 0,9 нет правильного ответа +6-8% массы тела или 5-6 л -3% раствор соляной кислоты -3% уксусной кислоты -5% цитрат натрия -увеличение количества моноцитов -все перечисленное верно -нашатырный спирт 5% раствор -острой постгеморрагической анемии -антирезусной сывороткой I группы -антирезусной сывороткой II группы +антирезусной сывороткой IV группы +наличием плазматических клеток -наличием бластных клеток -сдвиг влево до бластов +наличием бластных клеток -исследование костного мозга -исследование крови на общий анализ -мазке крови на 1000 лейкоцитов +мазке крови на 1000 эритроцитов -обычных мазках крови -смешиванием с эфиром +добавлением хлористоводородной кислоты (соляной кислоты) +?мясных помоев? Читайте также:
|
