Как сделать иммуноблот
Наличие в организме антител к боррелиям свидетельствует о наличии инфекции. Серологические методы исследования, основанные на обнаружении антител (IgM и IgG) в крови, помогают поставить правильный диагноз, хотя информативностьданного метода диагностики, к сожалению, ограничена. Причиной может быть невысокий уровень антител и наличие ложноположительных результатов.
Определение антител класса IgM часто дает неясные результаты. У части пациентов антитела IgM обнаруживаются в крови длительное время и не всегда говорят об острой инфекции. Антитела класса IgM иногда могут быть обнаружены спустя годы после возникновения инфекции или после лечения антибиотиками. В таких случаях важно понять, не являются ли результаты определения антител ложноположительными. Нередки случаи расхождения результатов тестирования антител тест-системами разных производителей, что зависит от специфичности используемых антигенов и чувствительности систем.
Определение антител класса IgG свидетельствует, чаще всего, о наличии боррелиозной инфекции (а не перенесенной в прошлом), дискутируется вопрос о наличии IgG при хронической инфекции. Однако и в данном случае так же не исключены ложноположительные или сомнительные результаты.
Таким образом, в диагностике боррелиоза часто возникает потребность в дополнительном исследовании, которое может дать более подробную информацию при неясной клинической картине или вызывающих сомнение результатах исследования IgM и IgG. Это метод иммунного блота, которое позволяет дать развернутый ответ по наличию антител к 9 различным антигенам боррелий. Считается, что основным при определенииIgM антител является антиген OspC, а при определении IgG – VisE.В случае прогрессирования болезни расширяется спектр антител к антигенам возбудителя, что ведет к длительной выработке IgM и IgG антител.
Данное исследование позволяет установить стадию заболевания и исключить ложноположительные результаты.
| Наименование исследования | Номенклатурный номер | Стоимость анализа | Сроки исполнения |
| Боррелиоз IgМ иммунный блот | 542 | 1800 | 2 дня |
| Боррелиоз IgG иммунный блот | 543 | 1800 | 2 дня |
Огромная благодарность процедурной медсестре. Во время предыдущих заборов были синяки. Процедура прошла быстро и безболезненно, хоть я и боялся. Также удобно СМС информирование и возможность посмотреть результаты на сайте. Всем рекомендую.
Понравилось хорошее отношение, часть анализов вообще бесплатно сделали. Главное - результаты соответствуютдругим лабораториям. Не понравилось – запущенная территория :). Все равно удобно – центр города.
Вежливый персонал. Материал брали быстро и не больно. Все сдала быстро и без очередей. Порадовали одноразовые шприцы и перчатки у персонала. У меня нет претензий к данной лаборатории. На консультации врач все доступно объяснила.
На сайте указан максимально возможный срок выполнения исследования. Он отражает время выполнения исследования в лаборатории и не включает время на доставку биоматериала до лаборатории.
Номенклатура МЗРФ (Приказ №804н): A12.06.057.000.02 Определение содержания антинуклеарных антител в крови, методом иммуноблоттинга
Подготовка к исследованию
Специальной подготовки к исследованию не требуется. Взятие крови проводится натощак или не ранее, чем через 4 часа после необильного приема пищи. Допустимо пить чистую не минеральную и не газированную воду. Чай, кофе, сок запрещаются.
Описание
Антинуклерные антитела (АНА) — группа аутоантител, которые связываются с ядрами собственных клеток организма и разрушают их. Они встречаются более чем у 90 % больных с диффузными болезнями соединительной ткани, а также часто отмечаются при аутоиммунных заболеваниях. На сегодняшний день известно около 200 разновидностей антинуклеарных антител. Однако в связи с редкой встречаемостью многих из них, не все разновидности используются для клинической диагностики.
Иммуноблот антинуклеарных антител позволяет в одном тесте одновременно провести исследование 9 основных разновидностей антинуклеарных антител: Anti-SS-A60, Anti-SS-A52, Anti-SS-B, Anti-Sm, Anti-RNP/Sm, Anti-Scl-70, Anti-Jo-1, антитела к центромеру В, антитела к рибосомиальному белку P – что позволяет провести дифференциальную диагностику в пределах основных системных ревматических заболеваний. Каждая разновидность аутоантител, выявляемая с помощью иммуноблота, обычно отмечается у пациентов с характерной клинической картиной, поэтому спектр аутоантител позволяет не только диагностировать заболевание, а также выявить риск развития определенных характеристик заболевания.
Иммуноблот антинуклеарных антител обычно используют на втором этапе серологического обследования при положительном результате других тестов, указывающих на присутствие в сыворотке обследуемого антинуклеарных антител. К таким тестам относится выявление антинуклеарного фактора (АНФ), антинауклеарных антител и антител к экстрагируемому ядерному антигену (ЭНА). Метод характеризуется высокой специфичностью для диагностики ревматических системных заболеваний.
Показания к назначению
воспалительные миопатии (полимиозит и дерматомиозит);
ювенильный хронический артрит;
аутоиммунный гепатит;
первичный билиарный цирроз и склерозирующий холангит.
обнаружение высоких титров антинуклеарного фактора, антинуклеарных антител, антител к экстрагируемому ядерному антигену, антител к ДНК, антител к нуклеосомам и антифосфолипидных антител.
Интерферирующие факторы
Повышают:
Прокаинамид, Дизопирамид, Пропафенон, некоторые ингибиторы АПФ, Бета-блокаторы, Гидралазин, Пропилтиоурацил, Литий, Карбамазепин, Фенитоин, Изониазид, Миноциклин, Ловастатин, Симвастатин.
Данное исследование выявляет антитела к 14 антигенам Borrelia afzelii (Ba), Borrelia garinii (Bg) и Borrelia burgdorferi sensu stricto (Bb), что позволяет не только подтверждать диагноз боррелиоза, но также и определять стадию болезни, тип возбудителя и оценить ответ на проводимую терапию. В связи с персистенцией возбудителя, во многих случаях иммунологический ответ не подчиняется классическим законам IgM–IgG перехода, поэтому даже в хронических стадиях заболевания могут преобладать антител класса IgM. В связи с этим, рекомендуется проводить тестирование антител к боррелиям класса IgG и IgM. При подозрении на нейроборрелиоз рекомендуется исследование интратекальной продукции антител к Borrelia burgdorferi.
Когда назначается
Диагностика и дифференциальная диагностика причин миелитов, невритов, энцефалитов, менингитов.
Подготовка к анализу
Специальной подготовки не требуется. Исследование проводится натощак (не принимать пищу 3 часа до исследования, можно пить воду).
Интерпретация
Отсутствие антител к антигенам Borrelia spp. классов IgG и IgM с высокой вероятностью исключает диагноз болезни Лайма (клещевой боррелиоз, Лайм-боррелиоз). Тест может быть отрицательным на ранней стадии инфицирования (антитела класса IgМ появляются через 2-3 недели, класса IgG - через несколько недель после укуса заражённого клеща); у пациентов с иммуносупрессией, связанной с гуморальным дефицитом, тяжелыми соматическими заболеваниями или под действием медикаментозной терапии, а также может указывать на отсутствие инфицирования Borrelia afzelii (Ba), Borrelia garinii (Bg) или Borrelia burgdorferi sensu stricto (Bb). Положительный результат определения антител к антигенам Borrelia spp. классов IgG или IgM может свидетельствовать о наличии инфицирования Borrelia afzelii (Ba), Borrelia garinii (Bg) или Borrelia burgdorferi sensu stricto (Bb). Результат исследования по антителам класса IgG следует считать положительным на боррелиоз при одновременном обнаружении не менее двух показателей, либо при высокоположительном результате определения IgG к VisE. Результат исследования по антителам класса IgM считается положительным при обнаружении антител к OspC, либо при наличии хотя бы одного положительного результата для IgM по VisE Bb, р41 и р39. При наличии слабоположительного ответа по IgM к OspC и отсутствии IgM к VisE Bb, р41 и р39 результат исследования считается сомнительным, может указывать на раннюю стадию инфицирования и требует повторного анализа через 1-2 недели.
Тестирование обычно проводится на образцах крови или слюны.
Существует три основных типа тестов для выявления ВИЧ-инфекции:
• тесты нуклеиновых кислот (основанные на реакции ПЦР);
• тесты, обнаруживающие антиген/антитела к вирусу иммунодефицита человека (тесты четвертого поколения);
• тесты, обнаруживающие только антитела к ВИЧ (тесты третьего поколения).
Тест нуклеиновых кислот (количественное определение РНК вируса методом ПЦР или анализ на вирусную нагрузку) подтверждает наличие вируса в организме и определяет его количество в исследуемом образце. Тест достаточно дорогой и не применяется для скрининга в рутинной практике, но может использоваться, если возможный риск заражения оценивается как высокий. Тест позволяет определить у части пациентов наличие инфекции уже начиная с 7-10 дня после заражения. Прием препаратов доконтактной (ДКП) или постконтактной профилактики (ПКП) заражения ВИЧ может влиять на результат анализа за счет снижения концентрации РНК вируса до неопределяемых значений. Длительность выполнения данного анализа от 2 до 7 дней.
Большинство всех экспресс-тестов основано на выявлении антител к вирусу в крови или слюне. Достоверность результата таких тест-систем составляет 99%. Экспресс-тесты могут проводиться как в условиях лаборатории (с венозной кровью), так и дома (кровь из пальца или слюна). Тесты, для выполнения которых используется венозная кровь, выявляют наличие антител быстрее тестов, где используется кровь из пальца или слюна.
Наборы для самотестирования по слюне предоставляют быстрый результат – через 20 минут. Одна из одобренных FDA тест-систем – OraQuick in-home HIV-test наиболее популярна; она проста в использовании, представляет собой тест-полоску и контейнер с жидкостью-реагентом в стерильной упаковке. Такие наборы для тестирования можно приобрести в магазинах или онлайн (средняя стоимость около 30-40$). Экспресс-анализы обычно способны выявить ВИЧ-инфекцию с 23-90 дня после контакта. Если при проведении экспресс-тестов получен положительный результат, необходимо лабораторное подтверждение с помощью последующего тестирования методом ИФА.
В России на данный момент стандартной процедурой лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции является использование метода ИФА с последующим подтверждением специфичности антител к вирусу в реакции иммунный блот (ИБ). Иммунный блот, или вестерн-блот, – наиболее чувствительный и специфичный метод определения антител к вирусу иммунодефицита, состоит из нескольких этапов: электрофорез белков в геле для разделения их по длине, затем перенос белков на нитроцеллюлозную мембрану (подготовка тест-системы) и детекция взаимодействий со специфичными к данным белкам антителами крови пациента. При необходимости подтверждения положительного результата ИФА с помощью иммуноблоттинга результат будет готов в среднем через 10 дней.
Алгоритм дообследования включает следующие этапы:
• при получении положительного результата ИФА ВИЧ, данный анализ проводят еще дважды с той же сывороткой и той же тест-системой;
• если из последующих ИФА хотя бы 1 положительный (2 из 3 анализов), сыворотка направляется в референс-лабораторию (при региональных СПИД-центрах), где снова повторяют ИФА, но уже на тест-системе другого производителя);
• если полученный результат положительный, то проводится исследование в иммунном блоте;
• если же отрицательный – проводят тест в третьей, отличной от предыдущих (по составу антигенов), тест-системе (повторный отрицательный результат говорит об отсутствии антител к ВИЧ, положительный – о необходимости проведения ИБ).
Выделяют три возможных результата реакции иммунный блот согласно критериям ВОЗ:
• ИБ положительный (обнаружение антител к двум или трем гликопротеинам ВИЧ) интерпретируется как наличие антител к вирусу иммунодефицита (есть ВИЧ-инфекция);
• ИБ отрицательный (не обнаружены антитела ни к одному из антигенов) интерпретируется как отсутствие антител к вирусу (нет ВИЧ-инфекции);
• ИБ неопределенный – обнаружены антитела к одному гликопротеину и/или каким-нибудь протеинам вируса. При неопределенном иммунном блоте рекомендуется повторить обследование через 2 недели, а затем через 3 и 6 месяцев после первого, так как возможна сероконверсия, то есть начало набора антител. Отрицательный результат после дообследования интерпретируется как отсутствие инфекции. Если результат по-прежнему неопределенный – требуется проведение дополнительных тестов.
Дополнительными методами могут быть выявление антигена р24, РНК вируса или провирусной ДНК (готовность анализов через 2-7 дней). Если результат анализов дополнительными методами положительный, то проводится повторное обследование на антитела (ИФА) через 2 недели от первоначального и далее каждые две недели до подтверждения наличия антител. В некоторых странах выявление провирусной ДНК или вирусной РНК на данном этапе подтверждает наличие ВИЧ-инфекции и не требует дополнительных исследований.
Таким образом, время получения результата исследования на ВИЧ варьирует от 20 минут до 10 дней и зависит от используемого теста.
Если окончательный результат анализа положительный, необходимо обратиться в центр СПИДа для постановки на наблюдение у инфекциониста, а также дообследования и назначения антиретровирусной терапии (АРТ).
Если же результат отрицательный, необходимо предпринимать дальнейшие действия для профилактики инфицирования, например, использование барьерного метода контрацепции (презерватив), а также прием препаратов, предотвращающих передачу вируса в группах высокого риска.
Рекомендации CDC (Centers for Disease Control and Prevention) призывают тестировать каждого в возрасте от 13 до 64 лет как минимум однократно в ходе диспансеризации. Люди из групп высокого риска должны тестироваться ежегодно или чаще.
К факторам, увеличивающим вероятность заражения ВИЧ, относятся:
• незащищенный вагинальный или анальный секс с ВИЧ-позитивным партнером, не получающим терапию или с партнером, чей статус неизвестен;
• использование общих игл и шприцов при употреблении инъекционных наркотиков;
• секс в обмен на деньги или наркотики;
• наличие заболеваний, передающихся половым путем;
• наличие гепатитов или туберкулеза;
• секс с партнером, имеющим риски, перечисленные выше.
Мужчины, которые имеют секс с мужчинами, должны обследоваться на ВИЧ раз в 3-6 месяцев.
Беременные женщины также должны обследоваться, т.к. это позволит, в случае положительного результата, своевременно начать прием АРТ и предотвратить передачу инфекции от матери к ребенку.
Так или иначе, знать свой ВИЧ-статус важно, чтобы быть в безопасности самому и обезопасить своих близких от возможного инфицирования.
Автор: врач-инфекционист Университетской клиники H-Clinic Коновалова Анастасия Александровна.
Медицинский редактор: руководитель Университетской клиники, к.м.н., врач-инфекционист Коннов Данила Сергеевич.
Читайте также: