Забор материала для исследования на бледную трепонему

Обновлено: 25.01.2025

Описание исследования

Сифилис – хроническое инфекционное заболевание, поражающее многие органы и системы организма. Возбудителем инфекции является бледная трепонема. Окружающая среда для нее губительна, однако биологические жидкости и влажные среды – те убежища, которые позволяют бактерии чувствовать себя комфортно и безопасно. К таковым относится сперма, секрет влагалища, слизь, гной и т.п. Инфицирование сифилисом может происходить следующим образом:

при половом акте;
парентерально (при инъекциях и ингаляциях);
при бытовом контакте;
при заражении плода инфицированной матерью (трансплацентарным путем).

Если организм поражен другими инфекциями, передающимися при половых контактах (например, герпесом, хламидозом, папиломовирусной инфекцией) или если при анальных контактах повреждена слизистая оболочка, это служит дополнительным фактором риска инфицирования сифилисом. У бледной трепонемы существует несколько антигенов, на которые организм вырабатывает антитела. Один из них имеет сходство с кардиолипином, применение которого позволяет обнаружить наличие антител к бледной трепонеме.

Любая фаза сифилиса является заразной, однако более всех отличаются в этом отношении первичная и вторичная стадии, если они сопровождаются наличием образований на коже и слизистых оболочках. Для попадания внутрь бледной трепонеме достаточно микроповреждений в коже или слизистой, откуда она стремится добраться в лимфатические сосуды, а затем и в лимфоузлы. После этого происходит распространение возбудителя по всему организму. Бледную трепонему может содержать слюна, грудное молоко, сперма и другие биологические среды инфицированного человека.

Продолжительность разных периодов сифилиса при классическом протекании заболевания следующая:

период инкубации – 21-28 дней;
первичная стадия, характеризующаяся отсутствием антител – 30 дней;
первичная стадия, в течение которой появляются характерные для инфекции антитела – 30 дней;
вторичная стадия – от 2 до 4 лет;
третичная стадия – от 4 лет.

Первичная стадия характерна:

образованием твердого шанкра (или первичной сифиломы – безболезненного образования в виде язвы или эрозии, имеющего плотное дно и появляющегося на месте проникновения возбудителя сифилиса – бледной трепонемы);
развитием регионального лимфангиита (воспаления лимфатических сосудов);
лимфаденита (гнойного воспаления лимфатических узлов).

В конце первичной фазы происходит самопроизвольное заживление шанкра и переход лимфаденита в полиаденит (множественное воспаление лимфатических желез), длящийся до пяти месяцев.

Вторая фаза заболевания характеризуется масштабным высыпанием вторичных сифилид, которые появляются в несколько заходов, по 1,5-2 месяца каждый, а затем сами исчезают. Вторичные сифилиды полиморфны (имеют множество форм) – папулезные, пятнистые, пустулезные. Может появляться сифилитическое облысение (аллопеция), «ожерелье Венеры» (сифилитическая лейкодерма – многочисленные бесцветные пятна на шее). Второе полугодие вторичного сифилиса характеризуется исчезновением воспаления лимфатических желез.

Третичный период сопровождается образованием бугорков и гумм (третичных сифилидов). Он наступает в 40% случаев, когда болезнь не лечилась вообще или лечилась недостаточно. Периоды высыпания разделяются довольно длительными (иногда многолетними) промежутками времени, в которые инфекция никак себя не проявляет. Третичный сифилис сопровождается разрушением пораженных тканей и органов. Третичные сифилиды содержат совсем незначительное количество агентов инфекции, поэтому почти не представляют угрозы заражения. Иммунная система при этом «успокаивается», что делает возможным очередное инфицирование (возникновение ресуперинфекции).

Первые три года заболевания – это период, в который наиболее вероятно заражение плода. При беременности инфекция чревата:

поздними выкидышами (на сроке 12-16 недель);
рождением мертвого ребенка;
ранним и поздним врожденным сифилисом.

Особенно опасны для плода пятый месяц беременности и процесс родов. Врожденный сифилис проявляется сразу после рождения и имеет признаки вторичного сифилиса. Поздний врожденный сифилис может проявиться в возрасте 5-17 лет и имеет признаки третичного сифилиса, характеризуемого триадой Гетчинсона:

гетченсоновскими зубами (передние верхние резцы имеют бочкообразную форму или форму отвертки);
паренхиматозным кератитом (поражением глаз);
лабиринтной глухотой.

Инфицирование сифилисом, как правило, подтверждается лабораторными тестами, однако, при наличии очевидных признаков, может быть доказано даже при отрицательных результатах исследований на характерные антитела.

Наиболее важно пройти диагностику следующим группам людей:

а) женщинам, планирующим стать матерью, т.к. возможны следующие варианты течения болезни:

латентный (бессимптомный) сифилис;
обезглавленный сифилис (без образований твердых шанкров, при попадании трепонемы непосредственно в кровь в процессе переливания или в случае пореза);
бытовой сифилис;
сифилис, занесенный при инъекциях;

б) беременным женщинам, т.к. своевременная диагностика и лечение в течение первых 4 месяцев беременности дадут возможность уберечь плод от заражения.

Данный тест объединяет два вида исследований:

RW – специфический трепонемный тест, посредством которого выявляются суммарные антитела IgG и IgM к антигенам бледной трепонемы (Treponema pallidum) – инфекционного агента сифилиса;
RPR – нетрепонемный тест, цель которого – выявление суммарных антител классов IgG и IgM к кардиолипину (липиду, входящему в состав мембраны митохондрий и бактерий).

Выявление суммарного количества антител классов IgG и IgM к Treponema pallidum может быть использовано двояко:

в качестве теста, подтверждающего наличие сифилиса;
в качестве первичного тестирования, отличающегося достаточно высокой эффективностью.

Появление первых признаков сифилиса или образование твердого шанкра являются предпосылкой для проведения лабораторного исследования, цель которого подтвердить факт инфицирования. Антитела обнаруживаются через три или в течение четвертой недели после образования первой сифилитической язвы. Первичная сифилома своим появлением знаменует начало первичной серопозитивной (т.е. характеризующейся продукцией антител) стадии сифилиса. Таким образом, данный специфичный метод позволяет достаточно рано диагностировать инфекцию.

Присутствие антител класса IgG может наблюдаться в организме человека достаточно долго, иногда всю оставшуюся жизнь.

Антитела классов IgG и IgM к кардиолипину являются иммунным ответом на высвобождение из повреждаемых сифилисом клеток липоидных и липопротеиноподобных элементов. Они выявляются у 70-80% обследуемых лиц с первичным сифилисом. Если болезнь находится во второй фазе или раннем «спящем» состоянии, они присутствуют практически в 100% случаев. Их исследование применяется для диагностики и контроля эффективности лечения сифилиса.

Как правило, реакция RPR бывает положительной через неделю-полторы после появления видимого знака первичного сифилиса – шанкра. Также результат теста бывает положительным через 3-5 недель после заражения. Вторая стадия сифилиса характеризуется снижением титра антител. При позднем сифилисе у 30% обследуемых по тесту RPR антитела вообще не обнаруживаются. Значительному уменьшению количества возбудителя способствует эффективная терапия (в течение года титр может снизиться в 4 и больше раз). В 90-98 % после проведение лечения результат теста – отрицательный.

Поскольку данное обследование не относится к специфическим, то не исключены ложноположительные реакции. Так как появление антилипоидных антител характерно не только для сифилиса, но и для других трепонемных инфекций, то они могут появляться как иммунный ответ на эти инфекции, особенно если таковые сопровождаются повреждением тканей (характерно для аутоиммунных заболеваний).

При получении положительного ответа на RPR-тест обязательно проводится осмотр дерматологом-венерологом, и повторно исследуется кровь.

Ложноотрицательные ответы RPR бывают крайне редко. Обычно они обусловлены эффектом «прозоны», возникающем в данном случае при наличии очень большого количества антител. («Прозона» в контексте анализа RPR – это «обратный эффект» при очень высоких титрах антител. Такое состояние может стать толчком для химических реакций, не имеющих отношения к исследованию, но меняющих оптическую плотность раствора. Итог – получение отрицательного показателя, как бы говорящего об отсутствии антител при их очень высокой концентрации фактически).

Подготовка к исследованию

перед тестированием воздерживаться от физических и эмоциональных нагрузок;
за сутки до забора крови не употреблять алкоголь, за час – не курить;
по согласованию с лечащим врачом временно прекратить прием препаратов, могущих повлиять на результаты исследования;
непосредственно перед забором крови желательно 10-15 минут провести в полном покое.

Забор крови не осуществляется сразу после массажа, физиопроцедур, флюорографии, кольпоскопии, гастроскопии, биопсии, рентгеновского, мануального, инструментального, ректального, ультразвукового исследования, других диагностических и/или лечебных манипуляций.

Показания к исследованию

Исследование специфических суммарных антител IgG и IgM к антигенам бледной трепонемы назначается:

при подготовке к беременности;
при постановке диагноза «врожденный сифилис»;
после случайных половых связей;
при подготовке к операции;
при обследовании доноров;
в совокупности с другими лабораторными тестами для подтверждения сифилиса.

Исследование специфических суммарных антител IgG и IgM к кардиолипину проводится:

при первичном обследовании, если есть подозрение на сифилис (положительный ответ подтверждается одним из специфических трепонемных тестов);
при диагностике скрытого сифилиса (результат должен быть подтвержден двумя трепонемными тестами);
при обследовании доноров (с обязательным проведением трепонемного теста);
при общем обследовании.

Интерпретация исследования

Тест является качественным.

Результат исследования суммарных антител классов IgG и IgM к бледной трепонеме описывается коэффициентом позитивности (КП):

КП = оптическая плотность конкретной пробы/пороговое значение

Универсальность коэффициента позитивности позволяет применять его при проведении всех иммуноферментных исследований. Данная величина отражает, насколько позитивен конкретный показатель анализа. Он дает возможность врачам более точно истолковывать полученные результаты. Концентрация антител и коэффициент позитивности – показатели, не связанные между собой, поэтому КП нецелесообразно применять для наблюдения динамики течения заболевания или действенности проводимого лечения.

Интерпретация полученного показателя:

отрицательный ответ – <0,90;
сомнительный ответ – 0,90-1,10;
положительный ответ – > 1,10.

Реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном описывается формулировками: «отрицательная», «положительная».

Нормой в обоих исследованиях является отрицательный результат.

Положительный ответ свидетельствует:

о сифилисе в разных фазах;
о «серологическом шраме» - сохраняющемся некоторое время после курса лечения положительном результате.

Отрицательный результат может быть:

при отсутствии сифилиса;
при ранней первичной инфекции.

Сомнительным считается результат, когда невозможно вполне однозначно подтвердить наличие антител, характерных для присутствия в организме агента сифилиса. Для получения точного результата через полторы-две недели кровь на анализ отбирается повторно и еще раз исследуется.

Результат теста выдается на бланке лаборатории медицинской компании «Наука». Пример по данному анализу представлен ниже:

Ф.И.О.: Сидоров Иван Петрович Пол: м Дата рождения: хх.хх.хххх

Дата забора биоматериала: хх.хх.хххх

Исследование

Результат

Нормы интерпретации

Примечание

[506] Кровь на сифилис (реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном, антитела IgG и IgM к Treponema pallidum)

Дата выдачи (дата исследования): хх.хх.хххх

Реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном

Антитела класса M и G к Treponema pallidum

Интерпретация результата осуществляется с учетом клинической картины, истории болезни пациента, а также показателей других лабораторных исследований.

Прямые методы лабораторной диагностики сифилиса

Прямые методы диагностики служат для выявления бледной трепонемы (Т. pallidum) или генетического материала этого возбудителя в образцах, взятых из очагов поражения. Прямое выявление возбудителя сифилиса является абсолютным доказательством наличия заболевания. Найденный генетический материал (ДНК/РНК) может свидетельствовать как об активном, так и о ранее леченном сифилисе.

На ранней стадии болезни, возбудитель сифилиса активно размножается в очаге инфицирования, при этом антитела к антигенам бледной трепонемы (Treponema pallidum) начинают появляться только со второй недели после инфицирования. Бледная трепонема располагается в тканевых щелях, между волокнами соединительной ткани, вокруг лимфатических и кровеносных сосудов, в стенках и даже просветах лимфатических капилляров.

При медицинском обследовании, у пациентов с подозрением на сифилис, все высыпания на коже или слизистых оболочках следует считать сифилитическими. Исследованию на бледную трепонему подлежат все эрозивные и язвенные шанкры, мокнущие и эрозивные папулы, широкие кондиломы на коже и слизистых оболочках рта, половых органов и анальной области.

Материалом, который необходим для бактериологического исследования на бледную трепонему, является тканевая жидкость (серум). Если нет возможности исследовать высыпания (например, в случаях раннего сифилиса), то рекомендуется проводить пункцию увеличенного регионарного лимфатического узла с соблюдением всех правил асептики, то есть стерильными инструментами и соблюдая правила, направленные на предотвращение распространения микроорганизмов. Кроме того, образцы могут быть получены путем взятия спинномозговой жидкости (ликвора) или плодной жидкости.

Важным условием для обнаружения бледной трепонемы в пат. материалах является правильное взятие проб из сифилитических элементов. Затем содержимое полученных проб изучают в лаборатории.

Обнаружение бледной трепонемы методом темнопольной микроскопии (ТПМ).

В России в качестве рутинного метода прямой визуализации T. pallidum традиционно используется метод темнопольной микроскопии (ТПМ, dark field microscopy, DFM).

1. Конденсор темного поля

Исследование на бледную трепонему в темном поле зрения проводится с помощью стандартного микроскопа, снабженного конденсором темного поля.

Конденсор представляет собой двояковыпуклую линзу, прикрепляемую снизу предметного столика с таким расчетом, чтобы линза конденсора располагалась под отверстием предметного столика. Конденсор служит для собирания (конденсации) пучка световых лучей, что обеспечивает наибольшее освещение исследуемого предмета.

Неокрашенные живые бледные трепонемы не видны в световой микроскоп при обычном освещении препарата. Необходимые условия создаются путем замены обычного конденсора микроскопа особым конденсором, в котором центральная часть затемнена и проникновение лучей света происходит через узкую щель.

Вследствие получающегося при этом бокового освещения достигается отраженное свечение всех твердых частиц на темном поле (это называется "эффектом Тиндаля"), в том числе бледной трепонемы. Для получения темного поля необходим сильный источник света.

2. Бледная трепонема, характерные особенности при темнопольной микроскопии

Исследование в темном поле микроскопа позволяет изучать бледную трепонему (БТ) в живом виде, а также достоверно отличать её от других трепонем как по морфологическим признакам, так и по характерным особенностям движения.

Чтобы отличать бледную трепонему от морфологически сходных типов сапрофитных трепонем, бледные трепонемы при исследовании должны быть живыми. Темнопольное исследование взятого материала должно быть проведено немедленно, сразу после получения образца, поэтому оборудование должно быть подготовлено заранее.

В затемненном поле зрения бледная трепонема выглядит, как движущаяся тонкая спираль или тонкий нежный пунктир с серебристым оттенком, слабо преломляющие свет. Помимо этих бактерий, в препарате все поле зрения усеяно массой мельчайших светящихся точек, находящихся в хаотичном броуновском движении.

Бледные трепонемы движутся характерным образом: вращаются вокруг своей продольной оси, перемещаются в одном направлении, качаются наподобие маятника или совершают волнообразные, сократительные или сгибательные движения ("шагающая трепонема"). Бледная трепонема движется плавно, что является важной особенностью этого микроогранизма.

T. phagedenis, электронная микроскопия

В полости рта и на половых органах встречаются сапрофитные трепонемы: T . refringens и T. phagedenis (reiteri) в урогенитальном тракте и T. denticola в полости рта.

Непатогенные трепонемы морфологически сходны с T. pallidum. От них бледную трепонему отличает толщина, характер движения и форма завитков.

T.refringens колонизирует наружные половые органы. Эта бактерия движется быстро и неравномерно, отличается большей толщиной, отсутствием сгибательных движений, и более пологими и широкими завитками. T.denticola является представителем нормальной микрофлоры полости рта, ее завитки короче и направлены под более острым углом. В нормальной флоре наружных половых органов человека встречается также T. phagedenis.

Наличие непатогенных трепонем затрудняет исследования материала, взятого из поражений в полости рта или прямой кишке. При дифференциации трепонем может ошибиться даже опытный исследователь, поэтому присутствие этих микроорганизмов делает малодостоверным проведение исследования с данным материалом. Если необходимо провести тестирование материала, полученного из одного из указанных выше мест, то предпочтительнее выполнить DFA или NAAT (лучше отдать предпочтение методу ПИФ или молекулярно-биологическим методам).

Методом темнопольной микроскопии невозможно отличить бледную трепонему от патогенных возбудителей других трепонематозов — T. pallidum carateum (пинта), T. pallidum pertenue (фрамбезия), T. pallidum endemicum (беджель).

3. Применение темнопольной микроскопии для диагностики сифилиса

Микроскопию в темном поле можно применять для диагностики первичных и вторичных поражений кожи при сифилисе в результате заражения половым путем. В редких случаях этот метод можно использовать при третичном сифилисе (в последнем случае — если материал взят из глубины инфильтрата или со дна язвы).

Также с помощью этого метода исследуют поражения при раннем врожденном сифилисе, когда заражение плода бледной трепонемой произошло в утробе матери. Чтобы подтвердить диагноз "врожденный сифилис", для приготовления препарата для микроскопии можно использовать ткань пуповины, органы плода, выжатый сок плаценты, амниотическую (плодную) жидкость, отделяемое слизистой оболочки носа, содержимое пузырей (при ладонно-подошвенной сифилитической пузырчатке), тканевой жидкости (серума) с раздраженных папул.

Метод темнопольной микроскопии, используемый для диагностики сифилиса, отличается простотой, дешевизной, быстротой и достаточно высокой чувствительностью. Однако у него есть известные недостатки – невозможность диагностики скрытых и поздних форм сифилиса и непригодность для контроля излеченности. Даже многократный отрицательный результат микроскопического исследования на бледную трепонему не может исключить сифилис.

Кроме того, для проведения исследования методом ТПМ микроорганизмы T. pallidum должны быть подвижными. В условиях применения пациентами различных антибактериальных препаратов, в том числе для лечения других заболеваний, диагностическая чувствительность ТПМ снижается. В подобных случаях необходимо исследование методом прямой иммунофлюоресценции (ПИФ) или проведение серологического обследования на сифилис.

Для повышения информативности лабораторной диагностики разрабатываются более чувствительные и специфичные прямые тесты на основе молекулярно-биологических технологий, например различные модификации метода ПЦР.

Метод прямой иммунофлюоресценции (ПИФ)

При необходимости микроскопия возбудителя в темном поле может быть дополнена прямой реакцией иммунофлюоресценции (ПИФ, direct fluorescent antibody test, DFA).

Прямой метод иммунофлюоресценции (по Кунсу) основан на взаимодействии антител, меченых флюорохромом, с антигеном, который находится на клетке, в клетке или в тканях. В качестве флюорохрома используют флюоресцеинизотиоционат (ФИТЦ).

Метод прямой иммунофлюоресценции предусматривает прямое выявление T. pallidum в образце при обработке материала специфическими моноклональными антителами. При этом на запарафинированные мазки или биопсийный материал накладываются противотрепонемные антитела, меченные флюоресцирующим красителем. Затем, образующиеся комплексы антиген—антитело исследуют под люминесцентным микроскопом.

В результате взаимодействия анти- T.pallidum антител, меченных ФИТЦ, и бледной трепонемы при люминесцентной микроскопии наблюдается специфическое ярко-зеленое свечение: бледная трепонема флюоресцирует ярко-зеленым цветом, сохраняя все морфологические признаки спирохеты.

Забор образцов производится таким же образом, как и для темнопольной микроскопии, при этом сам метод ПИФ является более точным, чувствительным и специфичным, чем ТПМ.

Метод ПИФ имеет преимущества перед темнопольной микроскопией для выявления бледной трепонемы. Флюоресцирующие микроорганизмы проще детектировать, вероятность спутать их с другими видами трепонем снижена. При этом возможна дифференцировка патогенных трепонем от непатогенных при исследовании материала со слизистых полости рта и прямой кишки, фиксация препаратов перед транспортировкой в лабораторию. Для исследования может быть использован материал, полученный при биопсии или аутопсии.

Зарубежные эксперты в настоящее время относят этот метод к числу устаревших из-за трудоемкости по сравнению с ТПМ и по причине того, что исследование не может быть выполнено «у постели больного» из-за необходимости использовать специализированное оборудование.

Кроме того, применение ПИФ ограничено из-за отсутствия промышленного производства и сертификации соответствующих ингредиентов в ряде стран, в частности, ФИТЦ-меченых моноклональных антител к патогенной бледной трепонеме.

Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Для диагностики сифилиса применяется прямой метод определения ДНК бледной трепонемы — метод ПЦР; это один из методов амплификации нуклеиновых кислот (МАНК, nucleic acid amplification test, NAAT).

Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) позволяет исследовать различные образцы (отделяемое сифилидов, биопсийный материал, биологические жидкости) в свежем, замороженном, фиксированном и парафинированном виде. В качестве объекта исследования методом ПЦР могут быть использованы соскобы шанкров и других высыпаний (папул, широких кондилом и т.д.), спинномозговая, амниотическая жидкость, сыворотка крови.

Метод ПЦР, предложенный в 1983 году сотрудником фирмы «Cetus» (США) Kary Mullis, заключается в амплификации (размножении) в пробирке определенных участков ДНК возбудителя в процессе повторяющихся температурных циклов. Преимуществом методики является то, что при ПЦР-диагностике размножению подвергается не сама бактерия, а только ее ДНК, причем не вся молекула ДНК, а только определенный фрагмент, являющийся маркером данного возбудителя.

ПЦР–тесты для выявления ДНК бледной трепонемы были разработаны в 1991 году одновременно в нескольких лабораториях. Этот метод позволяет выявить и идентифицировать единственную молекулу ДНК бледной трепонемы среди сотен тысяч других молекул, что делает потенциально возможной диагностику нейросифилиса, третичного, врожденного сифилиса при наличии единичных трепонем в исследуемом материале.

Метод ПЦР высокоспецифичен, чувствителен и воспроизводим при правильном проведении и подготовке образцов. Однако, применительно к диагностике сифилиса, методы МАНК пока используется в исследовательских целях.

Разработаны различные модификации метода ПЦР, которые используются для диагностики сифилиса:

PCR в режиме реального времени (PCR-RT). Учет полученных результатов происходит автоматически в режиме реального времени по уровню свечения флюорохромных меток;
методика PCR-анализа с помощью обратной транскриптазы (PCR-ОТ);
мультиплексная PCR (PCR-М, М-ПЦР), которая позволяет в биологической пробе одновременно определять наличие возбудителей нескольких заболеваний.

Основными достоинствами метода ПЦР и его модификаций является универсальность (возможность обнаружить любые нуклеиновые кислоты), весьма высокая чувствительность (80 – 94,7 %) и высокая специфичность (до 100 %). Результат получается быстро, для анализа необходима проба малого объема (несколько микролитров). Современные методы ПЦР позволяют одновременно исследовать нескольких возбудителей заболеваний, а также получать документальный ответ в виде фотографий и вносить результаты диагностики на компьютерные информационные носители. К недостаткам метода ПЦР-анализа следует отнести высочайшие требования к оснащению лаборатории, качеству тест–наборов и регламенту исследования.

Метод ПЦР является дополнительным и может быть рекомендован, главным образом, для исследования отделяемого эрозивных и язвенных высыпаний при подозрении на первичный сифилис, особенно при их локализации на слизистой оболочке рта; при применении пациентами местных и системных антибактериальных средств накануне обращения к врачу; при отрицательных результатах серологических тестов в начале первичного периода, когда ошибка метода ТПМ особенно значима.

Развитие высокочувствительного метода ПЦР и разработка его модификаций, оценивается как весьма перспективное. Особую важность этот метод приобретает при диагностике первичного серонегативного сифилиса (при котором серологические исследования дают отрицательный результат), раннего скрытого, врожденного сифилиса и нейросифилиса.

Препятствием к широкому внедрению метода ПЦР для диагностики сифилиса является отсутствие в массовой доступности тест-систем, разрешенных к медицинскому применению. В США применение ПЦР рекомендовано лабораториям, располагающим соответствующими тест-системами (в том числе созданными в самих лабораториях, in house). В России и странах Восточной Европы широкое использование метода лимитируется небольшим количеством наборов реагентов, прошедших валидацию и разрешенных к медицинскому применению на территории соответствующих государст

NASBA

NASBA - Nucleic Acid Sequence-Based Amplification, амплификация, основанная на последовательности нуклеиновых кислот (другие переводы - реакция амплификации на основе нуклеотидной последовательности нуклеиновых кислот, реакция транскрипционной амплификации). Методика NASBA основана на выделении РНК микроорганизма (в отличие от полимеразной цепной реакции, где используется ДНК). Этот метод тестирования считается одним из самых перспективных и многообещающих направлений молекулярной диагностики.

Использование в качестве мишени для NASBA видоспецифических участков рибосомальной РНК обеспечивает методу высокую специфичность. Так как РНК — менее стабильный по сравнению с ДНК тип генетического материала, который быстрее деградирует при разрушении клеток, то на основании результатов выявления РНК можно судить о наличии в образце жизнеспособных микроорганизмов, например, после проведенного лечения. С практической точки зрения важно, что для проведения NASBA в лабораторных условиях используется то же оборудование, что и для проведения ПЦР в реальном времени (PCR-RT). Кроме того, исходный биоматериал после ПЦР может исследоваться методом NASBA. В результате этого существует возможность интегрирования указанного метода в протокол лабораторного обследования, что позволит верифицировать возбудителя

Отдельные исследовательские коллективы уже получают достаточно перспективные результаты при изучении сифилитической инфекции методом NASBA и NASBA-RT, используя в качестве качестве мишени фрагмент гена 16s рРНК бледной трепонемы. Полученные данные позволяют отнести метод NASBA к диагностически перспективным в изучении сифилитической инфекции наряду с имеющимися методами диагностики.

Заражение сифилисом лабораторных животных

Задолго до открытия бледной трепонемы многие ученые стали проводить эксперименты по заражению сифилисом разнообразных животных. В естественных условиях животные сифилисом не болеют, но возможно искусственное заражение некоторых их видов. Первые успешные опыты были проведены на шимпанзе в начале 20-го века. Дальнейшие опыты на обезьянах привели к ряду блестящих научных открытий, но ввиду трудностей содержания и дороговизны обезьян, основными лабораторными животными стали кролики. Опыты с другими животными (холоднокровными, птицами, различными млекопитающими) давали отрицательный или недостаточный для практического применения результат. Некоторое значение имели только данные, полученные на морских свинках и мышах.

Заражение сифилисом кроликов является старейшим методом прямого выявления бледной трепонемы, т.к. кролик является наиболее чувствительным и удобным лабораторным животным для привития сифилиса. Заражение кроликов производят инокуляцией (введением микроорганизмов в ткани, от латинского inoculatio - "прививка") инфекционного материала в яичко. Чувствительность кроликов к инфекции Treponema pallidum практически 100%, если во взятом для прививки материале содержится достаточное количество бледных трепонем.

В качестве метода прямой детекции бледной трепонемы заражение сифилисом лабораторных животных уже давно не применяется для клинической лабораторной диагностики сифилиса. Работа с кроликами требует больших затрат на содержание хорошо оборудованного вивария. Это дорого, трудоемко и результат достигается только через достаточно продолжительное время. В настоящее время данный метод используется только в крупных исследовательских центрах в качестве «золотого стандарта» для оценки чувствительности других тестов.

Экспресс-анализ на сифилис

лечение у врача высшей категории с опытом работы не менее 25 лет;

экспресс-диагностика всего за 20 минут у венеролога, уролога и гинеколога;

экспресс-лечение венерических болезней – от 1 дня;

безболезненный забор анализов;

доступные цены;

новейшее диагностическое оборудование;

комплексное обследование в кратчайшие сроки – от 1 р/дня;

сохранение полной анонимности;

удобный график работы – без выходных и очередей. Запись!

безопасное и эффективное лечение.

Сифилис – венерологическое заболевание, передающееся, как правило, половым путем. Развивается оно при проникновении в организм бактерии бледной трепонемы.

Основная сложность в диагностике болезни – часто бессимптомное ее течение на ранних стадиях. Еще больше затрудняет ситуацию игнорирование первых признаков патологии, которые чаще всего не вызывают у пациентов особых опасений.

Оставшись без своевременного лечения, инфекция прогрессирует и постепенно поражает все органы и ткани. Избежать подобного помогает экспресс-анализ на сифилис.

Экспресс анализ на сифилис за 20 минут и тест-системы определят состояние Вашего здоровья! Запишитесь на сайте или по телефону 8 (495) 970-30-92

Когда назначается анализ на сифилис

Главной причиной для прохождения лабораторного исследования выступают явные симптомы заболевания.

Также экспресс-диагностика необходима в профилактических целях:

при случайной половой связи, частой смены партнера.
при беременности, особенно в момент постановки на учет;
при подготовке донора к процедуре переливания крови;
при устройстве на работу военных, медработников, поваров и др.;
во время ежегодной диспансеризации людей соответствующей профессии;
перед плановыми операциями и при оформлении в стационар.

Экспресс анализ крови на сифилис может проводиться по назначению врача или желанию самого пациента, подозревающего вероятность заражения.

Материал для исследования и подготовка к тесту

Лабораторное исследование проводится по венозной крови. До сдачи анализа накануне не есть жирную пищу и не употреблять алкоголь. Минимум за полчаса нельзя курить. Других особых рекомендаций для пациентов нет. Исследование крови проводится методом иммунохроматографического анализа. С его помощью специалисты определяют суммарное число антител класса M и G к бледной трепонеме. Подобное исследование может использоваться в качестве сверхчувствительного теста, способного определить заболевание на ранней стадии инфицирования.

При экстренной или плановой сдаче крови на сифилис, экспресс-анализ опровергает или подтверждает присутствие в организме антител к возбудителю. Иногда возможны ложноположительные результаты. Обычно это касается ВИЧ-инфицированных пациентов, а также людей с болезнью Лайма, некоторыми видами пневмонии, малярией, системной красной волчанкой. Повлиять на результат теста может беременность и употребление наркотиков.

При получении положительного результата экспресс-теста пациенту назначают дополнительные исследования.

Цена экспресс - диагностики: кровь на половые инфекции (сифилис, ВИЧ, гепатит В, гепатит С) за 20 МИНУТ! – 500 руб. за ед. Свяжитесь c нами любым удобным способом и запишитесь на прием на конкретную дату и время. Подробный прайс

Стадии развития сифилиса

Экспресс диагностика сифилиса результативна на любой стадии его развития. Но чаще всего применяется она на ранних этапах заражения.

Не откладывайте заботу о своем здоровье, сдайте анализ на сифилис сегодня! Запишитесь онлайн на сайте или по телефону: 8 (495) 970-30-92

Первым симптомом заболевания является твердый шанкр. Это небольшое кожное уплотнение с эрозией или язвой, появляющееся на месте проникновения инфекции. Если заражение произошло половым путем, он располагается на коже промежности или наружных половых органов. Это безболезненное образование, которое через некоторое время бесследно исчезает. Поэтому пациенты часто пропускают эту стадию.

Если на ранней стадии сифилиса экспресс анализ не был проведен, развитие болезни происходит по следующему сценарию:

Подготовка к сдаче анализа на сифилис

Анализ на сифилис, экспресс-методы определения заболевания

Если у вас есть малейшее подозрение на заражение сифилисом, вам надо срочно сдать анализы крови на сифилис. Одним из методов обследования пациента на сифилис является экспресс-диагностика на венерические заболевания (инфекции, передающиеся половым путем). Такой анализ можно сделать у нас в клинике в течении 20 минут.

Главное — необходимо понимать, чем скорее будет поставлен диагноз, тем больший процент вероятности вылечиться без серьезных осложнений на внутренние органы и системы.

Подготовка к сдаче анализа на сифилис

Для того, чтобы анализы на сифилис были более точными, к ним следует подготовиться. Для получения точных результатов анализов крайне важно строгое соблюдение пациентами правил подготовки к лабораторным исследованиям.

Требования для сдачи анализа на сифилис.

Требования для сдачи анализа совсем несложные. Кровь для исследования на сифилис берут натощак. Натощак — это через 12 часов после последнего приема пищи, лучше утром. В крайнем случае – не ранее, чем через четыре часа после еды. Можно пить воду. Накануне забора крови пациенту не следует употреблять алкоголь, наркотические и медикаментозные препараты, принимать жирную пищу. При взятии крови в более ранние сроки после приема пищи, в особенности жирной, а также после употребления алкоголя, могут выпадать неспецифические ложноположительные результаты.

Чтобы не получить ложноположительные результаты (ЛПР), не рекомендуется сдавать анализ во время лихорадочных состояний или непосредственно после перенесенных инфекционных заболеваний.

По тем же причинам не следует брать кровь у женщин — во время менструации, у беременных — в последние две недели перед родами и в ближайшие 10 дней после родов, у новорожденных — в первые 10 дней жизни. Нельзя брать кровь у больных с повышенной температурой, у пациентов ранее 24 часов с момента употребления ими спиртных напитков. Кровь не следует сдавать после рентгенографии, ректального исследования или физиотерапевтических процедур.

Венозная кровь – лучший материал для лабораторных исследований. Кровь для анализа берется из вены, в количестве 5-10 мл. Техника получения венозной крови из локтевой вены не отличается от стандарта взятия крови для других исследований в клинико-диагностической лаборатории.

Методы исследования сыворотки и плазмы крови на сифилис

Один из методов определения заболевания – серологические исследования. Они основаны на выявлении в сыворотке (плазме) крови антител, образующихся в организме больного при заражении сифилитической инфекцией. Такие исследования делят на нетрепонемные и трепонемные. При подозрении на наличие сифилиса серологические реакции являются обязательным компонентом обследования пациентов.

Привычный всем анализ на RW (реакция Вассермана) относится к нетрепонемным тестам. Современные интерпретации этого метода - RPR (быстрый плазмореагиновый тест) и VDRL (определение антител к кардиолипиновому антигену).

Экспресс-анализ на сифилис (это нетрепонемный анализ) не дает точного ответа на вопрос о наличии заболевания сифилиса у пациента. Суть метода состоит в следующем: проводится тест на преципитацию или осаждение с кардиолипиновым агентом. Результат экспресс-анализа на сифилис будет готов спустя 20 минут после забора крови. Если тест показывает положительный результат, то это следует рассматривать как причину для проведения более углубленных исследований (ИФА, РПГА,РИФ,антитела IgM и IgG).

Трепонемный анализ на сифилис представляет собой специфический тест, который выявляет только антитела к возбудителю сифилиса. Один существенный недостаток этого метода – антитела остаются в крови человека и после благополучного лечения, в течение всей оставшейся жизни.

Ложноположительные анализы крови возможны при ревматоидном артрите, ревматизме, туберкулезе, мононуклеозе, у беременных, у пожилых старше 60 лет, у людей с онкологическими, эндокринными, язвой желудка и т.д

Результаты диагностики оценивает врач-венеролог. Окончательный диагноз ставиться только врачом при положительных углубленных анализах .

Экспресс анализ на сифилис – доступная стоимость и быстрый результат.

Стоимость анализа на сифилис зависит от того, какой именно анализ вы хотите провести. Экспресс-анализ, проводимый в нашей клинике, имеет стоимость 1000р. Эта процедура является быстрой и эффективной, поэтому при малейшем подозрении (незащищенный секс, случайная половая связь, изнасилование, наличие подозрительных высыпаний) такой анализ сдать необходимо.

Самый быстрый и достоверный анализ, проводимый методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) — имеет вполне приемлемые цены в клинике «На Ленинском». Этот анализ выявляет как острые, так и латентные инфекции. Сроки получения результата анализа ПЦР на все скрытые инфекции – через 24 часа.

Не стоит рисковать здоровьем – запишитесь на прием к врачу венерологу по телефону: 8 (495) 970-30-92, 8 (903) 556-45-03. Клиника «На Ленинском» и платный венеролог в Москве — быстро, доступно, анонимно.

Исследование на бледную трепонему (темнопольная микроскопия)

Диагностика сифилиса имеет свои специфические черты и определенные методы. Поставить диагноз сифилис можно при наличии соответствующей клинической картины, а также при подтверждении со стороны дополнительных методов исследования – серологической, ПЦР-диагностики, микроскопического исследования. Микроскопия – наиболее давний метод диагностики большинства инфекционных заболеваний. В случае диагностики сифилиса используется темнопольная микроскопия, которая позволяет увидеть даже живые микроорганизмы.

Возбудителем сифилиса является бледная трепонема (бледная спирохета). Этот микроорганизм находится в межтканевом пространстве, между волокнами соединительной ткани, окружают русла лимфатических и кровеносных сосудов. Для того, чтобы точно определить наличие возбудителя сифилиса, биологический материал забирается для исследования с элементов сыпи, поверхности шанкров и со слизистых оболочек гениталий, ротовой полости и прямой кишки. В альтернативном случае возможен забор материала с лимфатических узлов (пункция узла).

Для того, чтобы исследование на сифилис в темном поле (темнопольная микроскопия) было максимально информативным, перед тем как собрать материал проводится гигиеническая обработка поверхности язвы или эрозии. В этом месте, с пораженной поверхности выделяется содержимое, в котором в большом количестве находится возбудитель. Ускорить процесс выделения, можно надавив на край раны. Если поверхность не повреждена, материал собирается путем поскабливания эрозии скальпелем.

Полученный биологический материал переносится на предметное стекло, изготавливается мазок, который затем и подвергается исследованию под микроскопом.

Темнопольная микроскопия также является и одним из самых дешевых методов диагностики сифилиса. В ходе исследования, на предметное стекло направляется узкий пучок яркого света (при помощи конденсатора). Свет падает практически сбоку от препарата, а исследователь в объективе видит темное поле. Спирохеты в свою очередь отражают и преломляют этот свет (феномен Тиндаля), что образует интересный оптический эффект – трепонемы начинают выглядеть как светящиеся подвижные спирали с несколькими завитками.

Особую важность данный метод темнопольной микроскопии имеет при диагностике первичного серонегативного сифилиса (при отрицательных результатах КСР),при диагностике нейросифилиса (обнаружение спирохеты в ликворе) и диагностике реинфекции сифилиса.

Специальной подготовки со стороны пациента не следует. В случае выявления эрозий или шанкров в области половых органов, перед исследованием необходимо провести гигиеническую обработку этих областей.

Наличие у пациента эрозий и язв при подозрении на заражение бледной трепонемой (сифилисом)

Диагноз сифилиса подтверждается при обнаружении во время исследования бледных трепонем.

Самые частые вопросы про анализы на сифилис

Может! Вероятность ошибки разных методов зависит прежде всего от периода болезни и общего состояния организма.
Нетрепонемные тесты чувствительнее всего в разгар болезни — во вторичном периоде. Из-за невысокой специфичности они часто дают ложноположительные результаты. Это может случиться из-за повышения температуры, гриппа или другой инфекционной болезни, недавно проведенной вакцинации, хронических болезней и ряда других причин.

Трепонемные тесты более чувствительны в поздний период. Они могут также давать ложноположительные результаты, но только при наличии в организме похожих на бледную трепонему патогенных бактерий, вызывающих другие заболевания: невенерические трепонематозы пинта (в России редко) или болезнь Лайма (передается через укус клещей).

Ложноотрицательные результаты тестов возможны у всех методов диагностики. Они зависят от иммунного ответа организма: нет ответа — нет реакции на сифилис. Такое возможно у ВИЧ-инфицированных людей, а также иммуно-ослабленных по другим причинам. Кроме того, существует и обратная реакция: гиперпродукция антител, эффект «прозоны», в котором антител так много, что они не дают друг другу осуществить реакцию с антигеном. В результате образуется ложноотрицательный результат.

Читайте также: