5 правила забора материала при диагностике орви
5 правила забора материала при диагностике орви
Для получения плазмы забор крови производят натощак или через 3 часа после приема пищи из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8 − 1,1 мм) в специальную вакуумную систему (сиреневые крышки − 6% ЭДТА) или одноразовым шприцем в пластиковые пробирки с цитратом натрия (3,8%-ный раствор цитрата натрия в соотношении 1:9), объем крови 4 мл. Пробирку закрывают крышкой и аккуратно переворачивают несколько раз вверх дном, чтобы кровь в пробирке тщательно перемешалась с антикоагулянтом (в противном случае кровь свернется, и выделение ДНК/РНК станет невозможным).
Гепарин в качестве антикоагулянта использовать нельзя! Для получения сыворотки забор крови проводят натощак из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8 − 1,1 мм) в одноразовые пробирки без антикоагулянта.
Условия хранения и перевозки материала:
- при температуре 20−25 °С — в течение 6 часов;
- при температуре +2+8 °С — в течение 6 часов с момента взятия материала для количественного определения нуклеиновых кислот; в течение 12 ч − для качественного определения нуклеиновых кислот и для определения полиморфизма в геноме человека. Транспортировать в вертикальном положении!
Для анализа отбирают первую порцию утренней мочи в количестве 15−25 мл в специальный сухой стерильный флакон или контейнер на 50-60 мл как у мужчин, так и у женщин. У женщин сбор мочи проводится после тщательного туалета наружных половых органов, чтобы в мочу не попали выделения из них. Желательно закладывать тампон во влагалище перед сбором материала для предупреждения контаминации мочи отделяемым из влагалища. Также не следует производить сбор мочи во время менструации.
У мужчин при мочеиспускании необходимо полностью оттянув кожную складку, освободить наружное отверстие мочеиспускательного канала.
При определении микобактерий туберкулеза для анализа отбирают среднюю порцию утренней мочи в количестве 15−25 мл в специальный сухой стерильный флакон или контейнер на 50-60 мл.
Условия хранения и перевозки материала:
- при температуре +2+8 °С – в течение 3 суток.
- Соскобное отделяемое из цервикального канала
- Соскоб из уретры у мужчин и женщин
- Соскоб крайней плоти головки полового члена (ГПЧ)
Транспортная среда с муколитиком
Решение о необходимости исследовать ту или иную локализацию (влагалище, уретра, цервикальный канал и др.) для анализа принимает лечащий врач на основании совокупности жалоб пациентки (та) и клинической картины заболевания.Для получения объективного результата необходимо, чтобы исследуемый клинический материал содержал возможно большее количество эпителиальных клеток и минимальное количество слизи и примеси крови (допустимо умеренное присутствие примесей в виде крови и слизи). Неправильное взятие биоматериала может привести к невозможности получения достоверного результата и, вследствие этого , необходимости повторного взятия биоматериала.
Порядок взятия клинического материала в пробирку с транспортной средой:
1. Открыть крышку пробирки.
2. С помощью одноразового стерильного зонда получить отделяемое соответствующего
биотопа (влагалище, уретра, цервикальный канал).
3.Перенести зонд с клиническим материалом в пробирку с транспортной средой объемом 1,5 мл, когда зонд упрется в дно пробирки, дополнительным усилием согнуть тонкую часть зонда до насечки, затем отломить и оставить зонд в пробирке .При необходимости получения клинического материала из нескольких биотопов повторить процедуру, каждый раз забирая клинический материал новым зондом в новую пробирку.
3. Пробирку плотно закрыть крышкой, промаркировать.
Особенности взятия клинического материала цервикального канала:
1.Клинический материал цервикального канала получают после введения во влагалище гинекологического зеркала с помощью уретрального зонда или цервикальной цитощетки (для исследования на ВПЧ необходимо достаточное количество эпителиальных клеток!).
2.Перед взятием клинического материала необходимо тщательно обработать отверстие цервикального канала с помощью стерильного марлевого тампона и затем обработать шейку матки стерильным физиологическим раствором.
3.После введения уретрального зонда в шеечный канал на 1,5 см его вращают несколько раз (2-3 полных оборота по часовой стрелке) и извлекают . При извлечении зонда необходимо полностью исключить его касание стенок влагалища.
4. Полученный клинический материал помещается в пробирку с транспортной средой (см. выше).
Особенности взятия клинического материала из влагалища:
В день обследования женщины не должны проводить туалет половых органов и спринцевание влагалища.
1. Клинический материал из влагалища получают с заднего или боковых сводов с помощью вагинального или уретрального зонда путем соскоба с поверхности эпителия.
2. Клинический материал должен быть получен ДО проведения мануального исследования.
3. Перед манипуляцией гинекологическое зеркало можно смочить теплой водой, применение антисептиков для обработки зеркала противопоказано.
4. У девочек (virgo) клинический материал получают со слизистой оболочки преддверия влагалища без использования гинекологического зеркала.
5. Полученный клинический материал помещается в пробирку с транспортной средой (см. выше).
Особенности взятия клинического материала из уретры у женщин:
1. Клинический материал из уретры получают с помощью уретрального зонда.
2.Перед взятием клинического материала пациентке рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 1,5-2 часов.
3. При наличии свободных уретральных выделений наружное отверстие уретры следует очистить с помощью ватного тампона.
4. При отсутствии свободных выделений может быть проведен легкий массаж уретры.
5. После введения инструмента в уретру на глубину 1 см необходимо продвигать его к наружному отверстию, слегка нажимая на заднюю и боковые стенки уретры (вращательные движения болезненны).
6. Полученный клинический материал помещается в пробирку с транспортной средой(см. выше).
Для исследования материала ,полученного из нескольких биотопов, процедуру повторяют, каждый раз используя новый стерильный зонд и новую пробирку.
Недопустимо смешивать материал из цервикального канала, влагалищного содержимого и уретры в одной пробирке!
Особенности взятия клинического материала из уретры у мужчин:
Перед взятием биоматериала пациенту рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение
1,5–2 часов. Для исключения искажений результатов определения состава микрофлоры урогенитального тракта мужчин из-за присутствия в урогенитальном тракте транзиторной микрофлоры в течение трёх дней перед взятием биоматериала рекомендуется половое воздержание или использование защищенного полового контакта.
1.Перед взятием соскоба из уретры обрабатывают головку полового члена в области наружного отверстия уретры тампоном, смоченным стерильным физиологическим раствором.
2.Производят массаж уретры. При наличии свободно стекающих из уретры выделений удаляют их сухим тампоном.
3.Вводят зонд в уретру на глубину 1-2 см. Несколькими вращательными движениями производят соскоб эпителиальных клеток и переносят зонд в пробирку с транспортной средой, обламывают и оставляют. Отделяемое забирают в достаточном количестве. Допустимо умеренное присутствие примесей в виде слизи, крови и гноя.
Взятия клинического материала с крайней плоти головки полового члена (ГПЧ):
Перед взятием биоматериала пациенту рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение
1.С помощью одноразового зонда делают соскоб эпителиальных клеток из соответствующего биотопа (крайняя плоть головки полового члена, препуциальный мешок) и переносят зонд в пробирку с транспортной средой, обламывают и оставляют.
Условия хранения и транспортировки биоматериала:
1. Пробирки с полученным клиническим материалом должны быть промаркированы.
2. В сопроводительном документе-направлении необходимо указать: ФИО, возраст пациентки (та), клинический материал, предполагаемый диагноз, показания к обследованию, дату и время взятия пробы, наименование учреждения (подразделения), направляющего клинический материал.
3. Если время транспортировки клинического материала от момента взятия до момента его доставки в лабораторию не более суток, то пробирку с клиническим материалом необходимо хранить и доставлять в лабораторию при температуре бытового холодильника (+ 4+10°С), не замораживая.
Особенности взятия эякулята (семенной жидкости):
Внимание! Перед взятием эякулята рекомендуется половое воздержание в течение трёх суток до исследования.
1.Перед сбором эякулята пациент мочится в туалете, пол-
ностью опорожняя мочевой пузырь.
2.После мочеиспускания пациент должен тщательно вы- мыть руки с мылом и провести туалет наружных половых органов с мылом и водой, головку полового члена и крайнюю плоть необходимо высушить стерильной салфеткой.
3.Эякулят получают путем мастурбации и собирают в стерильный контейнер объёмом до 60 мл.
4.Емкость с эякулятом герметично закрывают крышкой и маркируют.
Условия хранения материала:
- при комнатной температуре — в течение 6 часов;
- при температуре +2+8 °С — в течение 1 суток;
5. Секрета простаты (предстательной железы)
Внимание! Перед взятием секрета простаты рекомендуется половое воздержание в течение трёх суток до исследования.
При подозрении на острый простатит выполнять массаж простаты категорически запрещено.
1.Перед взятием секрета простаты головку полового члена обрабатывают стерильным ватным тампоном, смоченным физиологическим раствором.
2.Секрет простаты собирают после предварительного массажа простаты через прямую кишку, массаж проводит врач посредством энергичного надавливающего движения от основания к верхушке железы.
3.После окончания массажа выделившийся простатический секрет в виде свободно стекающей капли (0,5-1,0 мл) собирают в одноразовую сухую стерильную пробирку объёмом 2 мл или контейнер объёмом до 60 мл.
4.Емкость с секретом простаты герметично закрывают крышкой и маркируют.
Условия хранения материала:
- при комнатной температуре — в течение 6 часов;
- при температуре 2−8 °С — в течение 1 суток;
6. Остаточная моча после массажа простаты
При невозможности получить секрет, сразу после массажа простаты, собирают первую порцию мочи (в которой содержится секрет предстательной железы) в количестве 15-25 мл.
Особенности взятия остаточной мочи после массажа простаты:
Внимание! Перед взятием остаточной мочи после массажа простаты рекомендуется половое воздержание в течение трёх суток до исследования.
При подозрении на острый простатит выполнять массаж простаты категорически запрещено.
1.Пациент мочится в туалете, оставляя часть мочи в мочевом пузыре.
2.Перед сбором мочи головку полового члена обрабатывают стерильным ватным тампоном, смоченным физиологическим раствором.
3.В течение 1-3 минут пациенту проводят массаж предстательной железы, интенсивность массажа зависит от консистенции простаты: при мягкой предстательной железе осуществляют несильные надавливания, при плотной консистенции простаты силу давления увеличивают.
4.После массажа простаты пациент собирает первые 10-
15 мл мочи в стерильный пластиковый контейнер для сбора мочи, объёмом до 60 мл.
5.Емкость с мочой герметично закрывают крышкой и маркируют.
Условия хранения материала:
- при комнатной температуре — в течение 6 часов;
- при температуре +2+8 °С — в течение 1 суток;
1.Биопсийный материал помещают в стерильную пробирку со стерильным физраствором или водой (не более 0,5 мл) или в пустую стерильную пробирку.
2. Емкость с биоптатом герметично закрывают крышкой и маркируют.
Условия хранения и перевозки материала:
- при комнатной температуре — в течение 6 часов;
8.Биопсийный или аутопсийный материал
Материал забирают из зоны предполагаемого местонахождения возбудителя инфекции, из поврежденной ткани или из пограничного с поврежденным местом участка.
Кусочки ткани диаметром не более 5 мм помещают в одноразовые стерильные пробирки объемом 2 мл, содержащих соответствующую транспортную среду. Пробирку плотно закрывают. Макроаутоптат помещают в контейнер с физиологическим раствором или специальной транспортной средой.
Условия хранения и перевозки материала:
- при комнатной температуре — в течение 6 часов;
- при температуре +2+8 °С — в течение 3 суток;
- при температуре минус 20 °С — в течение 1 недели.
Материал забирают сухим стерильным ватным тампоном на пластиковой основе под местной анестезией (2 капли раствора декаина). Оттянув нижнее веко, вращающими движениями проводят зонд 4-5 раз по конъюнктиве, захватывая внешний и внутренний углы глаза.
После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в одноразовую стерильную пробирку с защелкивающейся крышкой объемом 2 мл, содержащую соответствующую транспортную среду. Погрузив рабочую часть зонда в транспортную среду, аккуратно обламывают пластиковый стержень на расстоянии не более 0,5 см от рабочей части и оставляют рабочую часть зонда с материалом в транспортной среде. Пробирку плотно закрывают крышкой.
Условия хранения и перевозки материала
- при комнатной температуре — в течение 6 часов;
- при температуре +2+8 °С — в течение 3 суток;
Слезную жидкость в количестве не менее 0,5 мл собирают, используя одноразовые пластиковые пипетки, в одноразовые стерильные пластиковые пробирки объемом 1,5 или 2,0 мл. Для усиления слезоотделения проводят провокацию слезоточивым веществом (обычно используют нашатырный спирт).
Условия хранения и перевозки материала:
- при температуре +2+8 °С — в течение 1 суток.
Используют пробы фекалий массой (объемом) примерно 1−3 г (1−3 мл). Исследование мазков неинформативно из-за низкого содержания в них возбудителей. Пробу в количестве 1 г (примерно) отдельным наконечником с фильтром или одноразовыми лопатками переносят в специальный стерильный флакон.
Условия хранения и перевозки материала:
Образцы нативных фекалий:
- при комнатной температуре — в течение 6 часов;
Спинномозговую жидкость в количестве не менее 1 мл собирают, используя одноразовые иглы, в одноразовые пластиковые про- бирки объемом 1,5 или 2,0 мл.
Условия хранения и перевозки материала:
- при температуре +2+8 °С — в течение 1 суток;
Перед получением слюны проводят трехкратное полоскание полости рта физиологическим раствором. Слюну забирают в количестве не менее 1,0 мл в одноразовые стерильные пластиковые пробирки объемом 2 мл. Пробирку плотно закрывают крышкой.
Условия хранения материала:
- при комнатной температуре — в течение 6 ч;
Взятие мокроты осуществляют в количестве не менее 1,0 мл в одноразовые градуированные стерильные флаконы с широким горлом и завинчивающимися крышками объемом не менее 50 мл. См. на сайте правила сбора мокроты.
Условия хранения и перевозки материала:
- при комнатной температуре — в течение 6 часов;
- при температуре +2+8 °С — в течение 3 суток;
15.Бронхоальвеолярный лаваж или промывные воды бронхов
Взятие материала осуществляют в одноразовые, плотно завинчивающиеся пробирки объемом 50 мл или в пробирку с 6% ЭДТА ,сиреневые крышки.
Условия хранения и перевозки материала:
- при температуре +2+8 °С — в течение 1 суток;
Мазки берут сухими стерильными ватными тампонами на пластиковой основе. Тампон вводят легким движением по наружной стенке носа на глубину 2−3 см до нижней раковины. Затем тампон слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход под нижнюю носовую раковину, делают вращательное движение и удаляют вдоль наружной стенки носа. После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую пробирку с защелкивающейся крышкой, содержащую соответствующую транспортную среду, и аккуратно обламывают пластиковый стержень на расстоянии не более 0,5 см от рабочей части, оставляя рабочую часть зонда с материалом в транспортной среде. Пробирку плотно закрывают крышкой.
Условия хранения и перевозки материала:
- при комнатной температуре — в течение 6 часов;
Взятие материала проводят в положении больного сидя с отклоненной назад головой путем введения с помощью одноразового шприца (зонда) теплого стерильного изотонического раствора натрия хлорида (3−5 мл) поочередно в каждый из носовых ходов. Промывную жидкость собирают через стерильную воронку в одну стерильную пробирку.
Не допускается повторное использование воронки без предварительного обеззараживания паром под давлением.
Условия хранения материала:
- при температуре +2+8 °С — в течение 6 ч;
Мазки берут сухими стерильными ватными тампонами на пластиковой основе вращательными движениями с поверхности миндалин, небных дужек и задней стенки ротоглотки. После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую пробирку со специальной транспортной средой и аккуратно обламывают пластиковый стержень на расстоянии не более 0,5 см от рабочей части, оставляя рабочую часть зонда с материалом в транспортной среде. Пробирку плотно закрывают крышкой.
Условия хранения и перевозки материала:
- при комнатной температуре — в течение 6 часов;
Перед взятием смывов из ротоглотки проводят предварительное полоскание полости рта водой. После этого проводят тщательное полоскание ротоглотки в течение 10−15 с 25−40 мл изотонического раствора натрия хлорида. Жидкость собирают через стерильную воронку в стерильный флакон объемом 50-60 мл.
Условия хранения и перевозки материала:
- при комнатной температуре — в течение 6 часов;
Перед взятием материала кожные элементы очищают ватным тампоном, смоченным эфиром или спиртом, затем прокалывают их у основания стерильной иглой или тонким капилляром пастеровской пипетки. Для ускорения поступления материала элемент сверху надавливают пинцетом. Корку или верхнюю часть везикул отделяют от кожи иглой, скальпелем. Исследуемый материал помещают в пробирку с транспортной средой.
Условия хранения и перевозки материала:
- при комнатной температуре — в течение 6 часов;
Для удаления присосавшегося клеща следует обратиться в травмпункт по месту жительства. При отсутствии такой возможности удалить присосавшегося клеща самостоятельно одним из следующих способов:
1.Накинуть на основание погружённого хоботка петлю из простой нити. Снимать клеща с кожных покровов следует осторожно, чтобы не оторвать хоботок!
2.Концы нити соединить вместе и медленно скручивать до полного затягивания петли и извлечения клеща. Избегайте раздавливания клеща!
3.Поместить клеща в сухую чистую пробирку объемом 1,5 мл.
При возможности клеща можно удалить при помощи кусочка льда, приложив его к месту присасывания на некоторое время. От холода клещ сам вытаскивает хоботок и отделяется.
Извлечённого клеща необходимо доставить в учреждение, где проведут исследование на заражённость его вирусом клещевого энцефалита.
При этом необходимо помнить, что:
1.Клещей нельзя смазывать маслами, кремами, вазелином, керосином и т.п.
2.Для исследования пригодны живые клещи, высушенные.
3.Удалённого клеща следует поместить в чистую посуду (пробирка, пузырёк, баночка и т.д.), в которую с целью создания повышенной влажности предварительно поместить чуть смоченную водой бумажную салфетку.
4.Хранение и доставка клещей с соблюдением вышеуказанных условий возможны в течение 2 суток.
Отбор и транспортировка проб биологического материала для исследований методом ПЦР на респираторные вирусы, включая высокопатогенные штаммы вируса гриппа А (H1N1) pdm09
Сбор клинического материала, упаковку и доставку проб осуществляет медицинский работник ЛПО, согласно МР 01/7161-9-34 «Организация и проведение лабораторной диагностики заболеваний, вызванных высокопатогенными штаммами вируса гриппа А (H1N1), у людей». Обязательно наличие сопроводительной информации по форме направления на микробиологические исследования. В направлении на исследование необходимо дополнительно указывать лиц, страдающих сахарным диабетом, ожирением, ВИЧ инфекцией, сердечно-сосудистой и легочной патологией, беременных.
Для забора и доставки материала лечебно-профилактические организации края должны быть обеспечены одноразовыми пластиковыми пробирками и флаконами с завинчивающимися крышками, зондами-тампонами в индивидуальной упаковке или пробирке (тубсере). Не допускается забирать материал в агаризованные транспортные системы среды (Эймса, Кери-Блейр, Стюарта).
Правила сбора клинического (секционного) материала
Сбор клинического материала и его упаковку осуществляет медицинский работник лечебно-профилактической организации, обученный требованиям и правилам биологической безопасности при работе и сборе материала, подозрительного на зараженность высокопатогенными штаммами вируса гриппа A(H1N1). Забор производят в стерильные одноразовые пластиковые пробирки, контейнеры, стерильными инструментами. Все виды работ проводят с соблюдением противоэпидемического режима, в строгом соответствии с требованиями действующих нормативно-методических документов.
Упаковка, маркирование, условия хранения и транспортирования материала для проведения лабораторной диагностики заболеваний, должны соответствовать требованиям действующих нормативно методических документов.
Для исследования забирают следующие виды клинического материала:
- мазки из полости носа (обязательный материал для ОТ-ПЦР-анализа);
- мазки из ротоглотки (обязательный материал для ОТ-ПЦР-анализа);
- носоглоточное отделяемое (для выделения вируса, ОТ-ПЦР-анализа);
- мокрота (при подозрении на вирусную или вирусно-бактериальную пневмонию).
Целесообразно также включать в исследование аспираты из трахеи, бронхоальвеолярный лаваж и биоптаты легких при возможности их забора. Данные процедуры осуществляет подготовленный медицинский персонал в соответствии с действующими нормативно-методическими документами (МР от 24.05.09 № 01/7161-9-34, МУК 4.2.3115-13).
Перечисленные выше процедуры по забору клинического материала обученный медицинский персонал осуществляет в средствах индивидуальной защиты органов дыхания (респиратор типа ШБ-1 или РБ «Лепесток-200»), защитных очках или щитках для защиты лица, бахилах, двойными резиновыми перчатками. После процедуры отбора материала перчатки обрабатываются растворами дезинфицирующих средств, руки после снятия перчаток обрабатываются антисептиками в соответствии с действующими нормативно-методическими документами.
Выбор времени забора клинического материала очень важен, так как наиболее высокое содержание вируса в дыхательных органах человека регистрируется в течение первых четырех дней после появления признаков заболевания. Образцы должны быть собраны в течение 3 суток после появления клинических признаков.
Для постмортальной диагностики используют аутоптаты легких, трахеи и селезенки.
От одного больного должно забираться не менее двух видов клинического материала. Обязательно следует забирать мазки из полости носа, мазки из ротоглотки. Каждый образец материала помещают в отдельную транспортную емкость.
Упаковка и транспортирование образцов.
Все материалы, доставляемые в лабораторию, должны быть герметично упакованы в соответствии с действующими нормативно-методическими документами:
1) в транспортную емкость (плотно закрывающиеся пластмассовые пробирки или флаконы с завинчивающимися крышками, проверенные на герметичность); плотно закрытый верхний конец транспортной емкости вместе с крышкой герметизируют различными пластификаторами (парафин, лейкопластырь и др., но не скотч), емкость маркируют;
2) в плотный полиэтиленовый пакет подходящего размера с ватой (или другим гигроскопичным материалом) в количестве достаточном для адсорбции всего образца в случае его утечки; полиэтиленовый пакет следует герметично заклеить или запаять.
В отдельный полиэтиленовый пакет вкладывают бланк заполненного направления. Пакеты с образцами от одного пациента вместе с направлением упаковывают во второй плотный полиэтиленовый пакет. Не допускается упаковывание образцов материалов от разных людей в один и тот же пакет.
Герметично закрытые полиэтиленовые пакеты помещают в термоизолирующий, плотно закрывающийся контейнер (термос, сумка-холодильник), приспособленный для транспортирования биологических материалов в вертикальном положении, исключающем переворачивание образцов.
В термоконтейнеры и термосы помещают охлаждающие элементы или пакеты со льдом. К наружной стенке термоконтейнера или термоса прикрепляют этикетку с указанием вида материала, условий транспортирования, названия пункта назначения. Сроки и условия транспортирования упакованных проб клинического материала указаны в приложении № 1. На транспортировочные термоконтейнеры должно быть нанесено название лечебной организации краской, устойчивой к действию моющих и дезинфицирующих средств.
Транспортирование проб клинического материала в лаборатории для первичного исследования материала осуществляется нарочно лицом, информированным о правилах доставки материала в соответствии с действующими нормативно-методическими документами. Термоконтейнеры, термосы после доставки материала двукратно обрабатываются дезинфицирующим раствором и возвращаются на следующий день лечебно-профилактической организации.
5 правила забора материала при диагностике орви
Забор материала из ротоглотки (для ПЦР-диагностики)
Состав набора для забора материала для диагностики гриппа1.Универсальная транспортировочная среда (или стерильный физ. р-р)
2.Зонд-тампон ПС-вискоза, индивидуальная упаковка, стерильный кат. № ИЛС 300202 (или зонд для взятия биологического материала из уретры и цервикального канала 1 шт/уп кат. №ЗГУ-ЦМ)
3.Микроцентрифужные пробирки градуированные 1,5 мл в 1 уп. 250 шт-(стерильные, Axygen, США) кат. № МСТ-150-С-S(или микроцентрифужные пробирки градуированные 2,0 мл в 1 уп.500шт. (Axygen, США) кат.№ МСТ-200-С)
Можно приобрести микроцентрифужные пробирки с разлитой транспортной средой
4. Пакеты ЗИП 2 шт.
Куда можно обращаться для приобретения расходных материалов ООО "ИнтерЛабСервис" (ИЛС) г. Москва (495) 925 05 54
ООО "ВИТА РОС" г. Ростов-на-Дону 269-93-20(21)
ЗАО " Вектор- Бест-Юг" г.Ростов-на-Дону 295-15-61; 295-13-19
"Медицина Плюс " г. Ростов-на-Дону, 255-13-21, 255-13-24 и др
(c) Управление федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по Ростовской области, 2006—2020 г.
Если Вы не нашли необходимую информацию, попробуйте зайти на старую версию сайта
Методики отбора проб для гриппа и ОРВИ
Лабораторная диагностика гриппа и острых и респираторных вирусных инфекций (ОРВИ) проводится в соответствии с санитарно–эпидемиологическими правилами СП 3.1.2.3117-13 «Профилактика гриппа и других острых респираторных вирусных инфекций».
Диагностика гриппа и ОРВИ основана на четырех методах
1. Обнаружение РНК или ДНК вирусов гриппа и ОРВИ при
исследовании мазков из полости носа и ротоглотки методом ПЦР;
2. Определение нарастания титра антител в парных сыворотках
крови больного
(первая порция крови из вены должна быть отобрана в начале заболевания (1-3 день); вторая порция - в период реконвалесценции (на 10-12 день заболевания и позднее) серологическим методом (реакция торможения гемагглютинации — РТГА);
3. Обнаружение антигенов вируса в мазках из носовой полости (цилиндрический эпителий, содержащий вирусные антигены)
больных методом иммунофлюоресцентного анализа (ИФ);
4. Выделение вирусов гриппа методом заражения куриных
эмбрионов или перевиваемых культур из отделяемого слизистой
носа вирусологическим методом.
Отбор клинических материалов должен проводиться обученным
персоналом с применением средств индивидуальной защиты.
Отбор материала проводится в соответствии с методическими
рекомендациями N 0100/4434–06–34 «Быстрая диагностика гриппа и других ОРВИ иммунофлуоресцентным методом».
Методические рекомендации "Организация и проведение лабораторной диагностики заболеваний, вызванных высокопатогенными штаммами вируса гриппа А (H1N1), у людей".
Письмо Роспотребнадзора от 26.09.2017 №01/12890-17-32 «О Направлении рекомендаций по отбору проб на респираторные вирусы»
Отбор, упаковка, хранение и транспортировка проб должна проводиться в соответствии с санитарно-эпидемиологическими правилами СП 1.3.2322–08 "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней".
Забор соскоба из полости носа (ИФ)
Оптимальным сроком отбора клинического материала являются первые 1–3 суток от начала заболевания. Перед взятием материала из носа необходимо очистить носовые ходы от слизи.
Забор соскобов из полости носа производят сухими стерильными зондами с вискозным тампоном (свабами)или велюр-тампон назофарингеальный. Зонд вводят по наружной стенке носа на глубину 3–5 см до нижней раковины. Затем зонд слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход под нижнюю носовую раковину, делают вращательное движение, дают пропитаться секретом в течение 1 минуты и удаляют вдоль наружной стенки носа.
После забора материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают стерильную одноразовую пробирку с 0,5 – 1,0 мл стерильного забуференного 0,9% раствора натрия хлористого, рН 7,2–7,4. Доставка материала в лабораторию в течение двух часов. Замораживание должно быть исключено.
Пробирки с тампонами должны быть дополнительно герметизированы скотчем или лейкопластырем для предотвращения разгерметизации и контаминации при транспортировке. При необходимости конец зонда отламывают, чтобы он позволил плотно закрыть крышку пробирки.
Каждая проба должна быть маркирована. Маркировка проб должна соответствовать сопроводительным документам.
Доставка в лабораторию для ИФ в течение нескольких часов.
Забор мазков из носоглотки и ротоглотки для ПЦР
В диагностических целях — при первом обращении за медицинской помощью, но не позднее 7 дней от появления симптомов гриппа/ОРВИ, и не позднее 14 дней — при бронхитах и пневмонии.
Мазки из ротоглотки берут сухими стерильными зондами с вискозным тампоном вращательными движениями с поверхности миндалин, небных дужек и задней стенки ротоглотки (обязательно!) после предварительного полоскания полости рта чистой питьевой водой.
После забора материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую пробирку с 0,5- 1,0 мл стерильного 0,9% изотонического раствора натрия хлористого.
Допускается хранение материала до проведения исследования в течение 3 суток при температуре от 2 до 8°С, более длительно — при температуре не выше минус 16°С.
При использовании пробирок типа Эппендорф конец зонда отламывают движениями вниз/вверх/вниз, придерживая крышкой пробирки с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть пробирку.
При заболеваниях нижних дыхательных путей (бронхит, бронхиолит, пневмония) собирают мокроту или аспират из трахеи:
- Мокроту при глубоком откашливании собирают в стерильные герметичные одноразовые пластиковые контейнеры после предварительного полоскания полости рта водой.
- Аспираты из трахеи (эндотрахеальный аспират)или БАЛ получают традиционным способом и помещают в стерильные герметичные одноразовые пластиковые контейнеры.
Допускается хранение материала до проведения исследования в течение 3 суток при температуре от 2 до 8⁰С, более длительно – при температуре не выше минус 16⁰С.
Кровь для серологического исследования (РТГА)
В лабораторию должны быть доставлены две порции сыворотки
больного (парные сыворотки). Первая порция крови должна быть
взята в начале заболевания (1–3 день). Вторая порция — в период реконвалесценции (на 10–12 день заболевания и позднее).
Кровь должна быть получена из локтевой вены в количестве 3–4 см 3 в стерильную сухую пробирку. После отделения сыворотки проба должна быть помещена в чистую посуду, герметично закрыта и сохраняться до забора второй пробы крови при температуре (+4 0 –8°С). Транспортировка обеих проб должна осуществляться с соблюдением холодовой цепи.
Биологический материал со слизистых оболочек верхних дыхательных путей
Сбор материала для культуральных исследований и микроскопии необходимо проводить до назначения специфической противомикробной терапии. Несоблюдение данного условия может привести к ложноотрицательному результату исследования. материал берут натощак или через 3-4 ч после еды. Для более полного открытия глоточного отверстия рекомендуется по время забора материала надавливать шпателем на корень языка. Важно, чтобы при извлечении тампона он не касался зубов, щек, языка. Для сбора мазков из носоглотки и ротоглотки используются стерильные зонды, которые после сбора материала погружают в контейнеры с транспортной средой, обеспечивающей стабильность и сохранение ростовых свойств микроорганизмов. Тип зондов, состав транспортных сред, методику сбора, а также условия хранения и транспортирования клинического материала следует уточнить в инструкции к используемым реагентам.
Хранение образцов
- Для культуральных исследований и микроскопии – при температуре 2–8°С не более 24 ч.
- Для выявления РНК/ДНК:
- при температуре 2–8°С – в течение 3 сут.;
- при температуре минус 16–20°С – до 3 мес.;
- длительно при температуре не выше минус 68°С.
Допускается лишь однократное замораживание–оттаивание материала.
Мазки со слизистой носоглотки и ротоглотки для выявления РНК/ДНК – рекомендуется совмещать мазки со слизистой носоглотки и ротоглотки в одной пробирке. Для этого сначала берут мазки разными зондами со слизистой нижнего носового хода, а затем из ротоглотки, при этом рабочие концы зондов после взятия мазков у пациента помещаются в одну пробирку с 500 мкл транспортной среды для хранения и транспортировки респираторных мазков, и исследуются как один образец. Материал берется после полоскания полости ротоглотки кипяченой водой комнатной температуры. Если полость носа заполнена слизью, перед процедурой рекомендуется провести высмаркивание. В течение шести часов перед процедурой нельзя использовать медикаменты, орошающие носоглотку или ротоглотку и препараты для рассасывания во рту. Мазки со слизистой носоглотки берут сухим стерильным назофарингеальным велюр-тампоном на пластиковом аппликаторе. Зонд вводят легким движением по наружной стенке носа на глубину 2–3 см до нижней раковины, слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход под нижнюю носовую раковину до носоглотки, делают вращательное движение и удаляют вдоль наружной стенки носа. Общая глубина введения зонда должна составлять примерно половину расстояния от ноздри до ушного отверстия (3–4 см для детей и 5–6 см для взрослых). После забора материала конец зонда с тампоном опускают в стерильную одноразовую пробирку с 500 мкл транспортной среды для хранения и транспортировки респираторных мазков до места слома, при этом гибкая часть зонда сворачивается спиралью, далее, прикрывая сверху пробирку крышкой, рукоятку зонда опускают вниз, добиваясь полного отламывания верхней части зонда. Пробирку герметично закрывают. Мазки из ротоглотки берут сухими стерильными зондами из полистирола с вискозными тампонами вращательными движениями с поверхности миндалин, небных дужек и задней стенки ротоглотки, аккуратно прижимая язык пациента шпателем. После забора материала рабочую часть зонда с тампоном помещают в стерильную одноразовую пробирку с 500 мкл транспортной среды и зондом с мазком из носоглотки. Конец зонда с тампоном отламывают, придерживая крышкой пробирки с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть пробирку.
Смыв из ротоглотки для диагностики эпидемического паротита (выделение РНК). Перед взятием смывов из ротоглотки проводят предварительное полоскание полости рта водой. После этого проводят тщательное полоскание ротоглотки (в течение 10-15 с) 25-40 мл изотонического раствора натрия хлорида. Жидкость собирают через стерильную воронку в стерильный флакон на 50 мл.
Хранение образцов
- при комнатной температуре – в течение 6 ч.
- при температуре от 2°С до 8°С – в течение 3 суток
- при температуре минус 20°С – в течение 1 недели
- при температуре минус 70°С – длительно
Мазки из ротоглотки и носа для диагностики дифтерии, пневмококковой, стафилококковой, стрептококковой инфекции (культуральные исследования) – для взятия материала используется сухой стерильный ватный тампон, вмонтированный в пробку пробирки или готовые транспортные среды, отдельным тампоном из ротоглотки и из носа. Взятие мазков осуществляют натощак или не ранее двух часов после еды, не касаясь тампоном языка, внутренних поверхностей щек и зубов.
Мазки из ротоглотки и носа для диагностики менингококковой инфекции (культуральные исследования) – тампон вводят через ротовую полость ватным концом кверху за мягкое небо в носоглотку и проводят 2–3 раза по задней стенке. При извлечении из ротоглотки тампон не должен касаться окружающих тканей (зубы, слизистая щек, язык, небный язычок). После извлечения тампона содержащуюся на нем слизь засевают на чашки (сывороточный агар и сывороточный агар с линкомицином) или помещают в транспортную среду для немедленной доставки в лабораторию. Допускается применение коммерческих питательных транспортных сред разрешенных к применению в Российской Федерации в установленном порядке.
Мазки из носоглотки для диагностики гриппа (культуральные исследования) собирают стерильными зондами с вискозными тампонами из нижнего носового хода. Зонд с тампоном вводят легким движением по наружной стенке носа на глубину 2–3 см до нижней раковины, слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход глубоко, делают вращательное движение и удаляют вдоль наружной стенки носа. Общая глубина введения зонда должна составлять примерно половину расстояния от ноздри до ушного отверстия (3–4 см для детей и 5–6 см для взрослых). После взятия материала тампон, не нарушая стерильности, помещают в пробирку с 2,0–5,0 мл вирусологической транспортной среды. Материал хранят в течение 24 ч при температуре 2–8°С, более длительно – при температуре не выше минус 16°С.
Мазки из носоглотки для диагностики коклюша (культуральные исследования) собирают стерильными зонд-тампонами с вискозным наконечником на алюминиевой основе, вмонтированный в пробку и пробирку с транспортной средой AMIES с активированным углем. Зонд извлекают из упаковки, вводят через носовые ходы и удерживают в носоглотке в течение 10 сек, чтобы он пропитался отделяемым слизистой носоглотки. После этого тампон извлекают, делая упор на боковую стенку носа, и немедленно помещают в пробирку с транспортной средой AMIES с активированным углем. Собранный материал необходимо исследовать в день получения (в исключительных случаях – хранить в холодильнике при температуре 2–8°С не более 12 ч).
Заднеглоточные мазки для диагностики коклюша (культуральные исследования) собирают стерильным зонд-тампоном с вискозным наконечником на алюминиевой основе, вмонтированным в пробку, вносят в пробирку с транспортной средой AMIES с активированным углем. Целесообразно использовать готовые комплекты. Зонд извлекают из упаковки, пробирку со средой вскрывают, конец зонда (на расстоянии 2 см от конца с тампоном) помещают в пробирку и изгибают под углом 135°, делая упор на внутренний край пробирки, и извлекают из пробирки. Аккуратно прижимая язык пациента шпателем, вводят изогнутый тампон в ротовую полость ниже язычка и собирают материал с задней стенки глотки, не задевая язык, слизистую оболочку щек и миндалины. Зонд с биоматериалом помещают в пробирку со средой AMIES, следя за тем, чтобы пробка, в которую вмонтирован тампон, плотно закрывала пробирку. Пробирки с транспортной средой AMIES до использования хранят при комнатной температуре. После взятия материала тампон, не нарушая стерильности, помещают в пробирку с 2,0–5,0 мл вирусологической транспортной среды. Собранный материал необходимо исследовать в день получения (в исключительных случаях – хранить в холодильнике при температуре 2–8°С не более 12 ч).
Метод «кашлевых пластинок» для диагностики коклюша (культуральные исследования): чашку со средой (Борде-Жангу или КУА с антибиотиками и добавлением 20% или 10% крови животных соответственно), хранящуюся при температуре 2–8°С, выдерживают при комнатной температуре, подносят на расстоянии 8–10 см ко рту кашляющего ребенка и удерживают ее в течение нескольких секунд (6–8 кашлевых толчков). Собранный материал необходимо исследовать в день получения (в исключительных случаях – хранить при температуре 2–8°С не более 12 ч).
Мазки со слизистой носоглотки для диагностики кори (культуральные и исследования, выделение РНК) – для взятия материала используют стерильный ватный тампон, которым протирают слизистую оболочку носоглотки с достаточным усилием, чтобы снять часть эпителиальных клеток. Тампоны помещают в маркированные стерильные пробирки с завинчивающимися крышками, в которых содержится 2–3 мл транспортной среды для вирусов. Если образец не может быть доставлен в вирусологическую лабораторию в течение 48 часов при температуре 4–8°С, пробирку с тампоном следует энергично встряхнуть так, чтобы смыть клетки, а затем извлечь тампон. Смывы центрифугируют при температуре 4°С при 500g (1500 об./мин) в течение 5 минут, затем осадок ресуспендируют в 2 мл питательной среды для клеточных культур.
Ресуспендированный осадок и надосадочную жидкость хранят раздельно при температуре –70°С и транспортируют в лабораторию на сухом льду в герметично закрытых флаконах, чтобы избежать попадания в них углекислоты.
Мазки из носоглотки для обнаружения антигенов внутриклеточных патогенов собирают стерильными зондами с вискозными тампонами из нижнего носового хода. Зонд с тампоном вводят легким движением по наружной стенке носа на глубину 2–3 см до нижней раковины. Затем зонд слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход под нижнюю носовую раковину глубоко (вплоть до слез у пациента), делают вращательное движение и удаляют вдоль наружной стенки носа. После взятия материала тампон помещают в пробирку с 3 мл 0,1 моль/л фосфатно-солевого буферного раствора. Для получения суспензии клеток тампон в пробирке тщательно отжимают о стенки пробирки, тампон удаляют, пробирку закрывают. Проводят центрифугирование в течение 5 мин при 3000 об/мин для осаждения клеток. Надосадочную жидкость осторожно удаляют, а осадок клеток ресуспендируют в нескольких каплях фосфатно-солевого буферного раствора и наносят на предметные стекла (не менее 3 шт.) раздельными каплями. Препарат высушивают и фиксируют 10 мин в охлажденном до 2–8°С химически чистом ацетоне. Фиксированные предметные стекла хранят при температуре 2–8°С не более 6–7 дней.
Читайте также: